Cấu Trúc Tính Chất Của Plasmid Phân Loại Plasmid - Tài Liệu Text

1. Trang chủ >
2. Khoa Học Tự Nhiên >
3. Sinh học >

Cấu trúc Tính chất của plasmid Phân loại plasmid

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (360.63 KB, 23 trang )

- Mang những vị trí nhận biết duy nhất của một số enzym giới hạn. Các vị trí cắt giới hạn này có tác dụng mở rộng khả năng xây dựng vector tái tổ hợp từ vectorban đầu. - Có kích thƣớc càng nhỏ càng tốt để có thể thu nhận một lƣợng DNA tối đa.Hơn nữa, kích thƣớc vector càng nhỏ thì càng dễ xâm nhập vào tế bào vi khuẩn, càng đƣợc sao chép nhanh và hiệu quả.- Tồn tại đƣợc trong tế bào vi khuẩn qua nhiều thế hệ và ít gây xáo trộn nhất cho tế bào chủ.- Các vector biểu hiện cần chứa thêm promoter thích hợp cho việc biểu hiện gen trong sinh vật chủ. Ngoài ra các vector này cũng cần mang các vector chọn lọc đặcbiệt nhằm dễ dàng chọn lọc cá thể sinh vật chủ có mang vector tái tổ hợp. Các vector thƣờng sử dụng trong biến nạp là plasmid và phage

2.2.2 Plasmid

Plasmid là phân tử DNA dạng vòng có kích thƣớc phân tử nhỏ, có trong vi khuẩn và vi sinh vật khác, có khả năng nhân bản độc lập với chromosome của tế bàoký chủ. Chúng có khả năng mang một hoặc nhiều gen, thƣờng là gen mã hóa các chất có ích cho vi khuẩn. Ví dụ, plasmid mang gen Ampicillin hoặc Chloramphenocol sẽgiúp vi khuẩn chủ kháng lại và tồn tại trong mơi trƣờng có kháng sinh này. Tính kháng với loại kháng sinh nào đó đƣợc xem nhƣ là một dấu hiệu chọn lọc, hay đặc điểm đểnhận diện quan trọng giúp khẳng định sự hiện diện của gen ngoại lai.

2.2.2.1 Cấu trúc

Cấu trúc plasmid bao gồm vùng ori origin of replication giúp quá trình nhân nhanh về số lƣợng nhƣng không phụ thuộc vào nhiễm sắc thể của vi khuẩn chủ.Những plasmid nhỏ có thể sử dụng DNA của tế bào kí chủ cho việc nhân bản của nó, nhƣng đối với các plasmid lớn, chúng mang những gen mã hóa chun biệt giúp choq trình tái bản của chính nó. Tuy nhiên một vài plasmid có thể gắn vào nhiễm sắc thể của vi khuẩn vì vậy số lƣợng plasmid đƣợc nhân lên cùng với sự phân chia tế bàovi khuẩn. Những plasmid hợp nhất gọi là episome thƣờng ổn định qua nhiều chu kì phân chia tế bào, nhƣng trong một giai đọan nào đó plasmid cũng có thể ở dạng tự do.Vùng chèn DNAHình 2.2 Mơ hình plasmid sử dụng cho cloning Nguồn tài liệuT.A. Brown, 1997.

2.2.2.2 Tính chất của plasmid

- Plasmid có DNA là chu trình kín độc lập với tế bào vi khuẩn. - Plasmid mang một gen hay nhiều gen.- Plasmid có khả năng sống sót trên mơi trƣờng có nồng độ một số chất hóa học ví dụ nhƣ ampicilin.- Khi plasmid mang gen kháng, ngƣời ta dùng chất kháng này nhƣ một marker chọn lọc.

2.2.2.3 Phân loại plasmid

Phân loại plasmid đƣợc dựa vào những đặc tính cơ bản mã hóa bởi các gen của nó. Có 5 loại plasmid đƣợc định tính nhƣ sau:Loại 1: F plasmid Fertility chỉ mang tra gen, có khả nạng chuyển vị và tiếp hợp. Ví dụ F plasmid của E. coli.Loại 2: R plasmid resistance mang gen mã hóa các hợp chất kháng lại các chất kháng sinh giúp tế bào kí chủ tồn tại trong mơi trƣờng sống. Ví dụ RP4 trong vi khuẩnPseudomonas. Loại 3: Col plasmid tạo ra colicin gây chết vi khuẩn khác. Ví dụ ColE1trong E. coli. Loại 4: Degradative plasmid giúp kí chủ tạo các chất sinh học có tính chất đặcbiệt trong điều kiện nào đó, nhƣ toluen, salycylyc xit. Ví dụ TOL plasmid trong Pseudomonas putida.Loại 5: Virulence plasmid xác định khả năng gây bệnh của vi khuẩn chủ. Ví dụ Ti plasmid trong Agrobacterium tumefaciens gây bệnh bƣớu trên cây hai lá mầm.Trong các thí nghiệm phân lập và biến nạp gen thƣờng sử dụng plasmid có ba đặc tính cơ bản sau:- Trọng lƣợng phân tử thấp. - Khả năng thăm dò các tính trạng chọn lọc trên tế bào chủ.- Có cloning site đủ cho một lƣợng lớn restriction enzyme.

2.2.3 Phage

Xem Thêm

Tài liệu liên quan

• Hoàn thiện quy trình biến nạp đoạn dna vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5
  • 23
  • 1,343
  • 15

Tải bản đầy đủ (.pdf) (23 trang)

Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về

(360.63 KB) - Hoàn thiện quy trình biến nạp đoạn dna vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5 -23 (trang) Tải bản đầy đủ ngay ×