Nhuộm Gram | Phương Pháp Nhuộm Gram | CT - Bimetech

Trang chủ » Bộ Kit Nhuộm Gram » Nhuộm Gram | Phương Pháp Nhuộm Gram | CT - Bimetech

Có thể bạn quan tâm

Sign in Sign in Welcome!Log into your account your username your password Forgot your password? Password recovery Recover your password your email Search
  • Sign in / Join
Sign in Welcome! Log into your account your username your password Forgot your password? Get help Password recovery Recover your password your email A password will be e-mailed to you. BIMETECH Home Vi sinh Môi trường vi sinh Phương pháp nhuộm Gram Share on Facebook Tweet on Twitter
  • tweet

Phương pháp nhuộm Gram

Nhuộm gram là một kỹ thuật phổ biến được sử dụng để phân biệt hai nhóm vi khuẩn lớn dựa trên sự khác nhau về đặc điểm thành tế bào. Quy trình nhuộm gram có thể phân biệt giữa nhóm vi khuẩn gram dương và gram âm bởi nhuộm màu những tế bào này hoặc đỏ hoặc tím. Vi khuẩn gram dương nhuộm màu tím do thành tế bào của chúng có một lớp peptidoglycan dày, do lớp này giữ lại hóa chất tím kết tinh trong dung dịch nhuộm trong thành tế bào. Mặt khác, vi khuẩn gram âm sẽ nhuộm màu đỏ, do lớp peptidoglycan trong thành mỏng hơn nên nó không giữ tím kết tinh lại trong quá trình nhuộm.

Nguyên lý của nhuộm gram

Nhuộm gram bao gồm ba quy trình: nhuộm với một thuốc nhuộm tan trong nước được gọi là tím kết tinh (crystal violet), khử màu, và nhuộm hóa chất tương phản, thường là với safanin. Do sự khác nhau về độ dày của lớp peptidoglycan trong màng tế bào giữa Gram dương và gram âm, vi khuẩn gram dương (với một lớp peptidoglycan dày hơn) giữ lại tím kết tinh trong quá trình khử màu, trong khi vi khuẩn gram âm mất màu tím kết tinh và được nhuộm màu của safarin trong quy trình nhuộm cuối cùng. Quy trình này bao gồm ba bước:

  1. Tế bào được nhuộm với thuốc nhuộm tím kết tinh. Tiếp theo, một dung dịch iốt (iodine và potassium iodide – dung dịch lugol) được bổ sung vào để tạo một phức hợp giữa i ốt và tím kết tinh. Phức hợp này là một phân tử lớn hơn tím kết tinh ban đầu và iốt  và không tan trong nước.
  2. Chất khử màu như ethyl alcohol hoặc acetone được bổ sung vào mẫu, nó loại nước trong lớp peptidoglycan, làm nó co lại và thắt chặt vào. Phức hợp tím kết tinh iốt không thể đi ra khỏi lớp peptidoglycan đã co lại, và bởi vậy nó bị giữ lại trong tế bào của vi khuẩn gram dương. Ngược lại, màng ngoài của vi khuẩn gram âm bị hủy hoạt và lớp peptidoglycan mỏng hơn của nó không thể giữ phức hợp tím kết tinh iốt và do đó màu bị mất.
  3. Một thuốc nhuộm tương phản, như safranin tan kém trong nước, được bổ sung vào mẫu, nó có màu đỏ. Vì safranin nhẹ hơn crystal violet, nó không phá vỡ màu tím trong tế bào gram dương. Tuy nhiên, tế bào gram âm được khử màu ở bước trước sẽ được nhuộm màu đỏ của safarin.

Quy trình nhuộm gram:

Hóa chất:

  • Tím kết tinh (nhuộm đầu tiên)
  • Dung dịch iốt/ Lugol (chất bắt thuốc nhuộm mà cố định tím kết tinh trong thành tế bào)
  • Chất khử màu (ví dụ cồn-ethanol)
  • Safranin (thuốc nhuộm thứ hai)
  • Nước (ưu tiên trong chai cổ vịt)
  1. Đặt mẫu trên lam kính để khô tự nhiên để chuẩn bị nhuộm. Hơ nóng lam kính chứa mẫu hai hoặc ba lần trên đèn cồn hoặc đèn Bunsen để mẫu bám chặt vào lam.
  2. Bổ sung thuốc nhuộm đầu tiên (tím kết tinh) vào mẫu/ lam kính và ủ trong một phút. Rửa lam với một dòng nước nhẹ tối đa trong năm giây để loại bỏ tím kết tinh không được bắt giữ.
  3. Bổ sung dung dịch iốt trong 1 phút – nó là một chất bắt nhuộm, hoặc một tác nhân mà cố định tím kết tinh vào thành tế bào vi khuẩn.
  4. Rửa mẫu/ lam kính với acetone hoặc alcohol trong 3 giây và rửa với một dòng nước nhẹ. Cồn sẽ khử màu mẫu nếu nó là vi khuẩn gram âm, do loại bỏ tím kết tinh. Tuy nhiên, cần chú ý rằng nếu sử dụng cồn quá lâu màu tím kết tinh trên vi khuẩn gram dương có thể bị loại bỏ.
  5. Bổ sung thuốc nhuộm thứ hai, safranin, ủ lam kính trong khoảng 1 phút. Rửa với một dòng nước nhẹ tối đa 5 giây. Nếu vi khuẩn là gram dương, nó sẽ giữ nguyên màu nhuộm đầu tiên (tím kết tinh) và không hấp thụ thuốc nhuộm thứ hai (safranin), khiến nó nhìn có màu tím dưới kính hiển vi. Nếu là vi khuẩn gram âm, nó sẽ mất màu nhuộm đầu tiên và hấp thụ màu nhuộm thứ hai, khiến nó có màu đỏ khi nhìn dưới kính hiển vi.
Phương pháp nhuộm Gram
Phương pháp nhuộm Gram

Trên đây là bài viết tổng quan về quy trình nhuộm gram. Chúng tôi rất hy vọng bài viết sẽ hữu ích cho Quí khách hàng. Ngoài ra chúng tôi cung cấp một hóa hóa chất vật tư sinh học như: Indigo carmine, thạch chocolate, thạch nutrient, trypton water, MHA agar… Chúng tôi rất mong nhận được sự hỗ trợ và ủng hộ của Quí khách.

RELATED ARTICLESMORE FROM AUTHOR

Máy nhuộm gram tự động

PCA Agar

Lithium chloride LiCl

LEAVE A REPLY Cancel reply

Please enter your comment! Please enter your name here You have entered an incorrect email address! Please enter your email address here

Save my name, email, and website in this browser for the next time I comment.

Δ

Môi Trường IVF

Bộ kít xét nghiệm phân mảnh tinh trùng

bimetech - 17/11/2021 0

Môi trường nuôi phôi đơn bước

bimetech - 07/03/2019 0

Chọn lọc tinh trùng không phân mảnh ADN

bimetech - 06/08/2018 0

Môi trường bảo quản lạnh tinh trùng-Refrigeration Medium-TYB

bimetech - 07/07/2017 0 Công ty cổ phần BIMETECH Địa chỉ: Số 27-Ngõ 35-Nguyễn An Ninh-Hoàng Mai-Hà Nội Hotline: 024.22.300.666 Ms. Hồng: 0974.90.59.55Contact us: info@bimetech.vn

Recent Posts

  • Máy nhuộm gram tự động
  • Hoá Chất Pyridine
  • Nến hạt đúc mô
  • Hoá chất Chloroform
January 2025
M T W T F S S
12345
6789101112
13141516171819
20212223242526
2728293031
« Aug © Công ty cổ phân BIMETECH Hotline

Từ khóa » Bộ Kit Nhuộm Gram