TCVN-12621-2019-Phan-bon-Xac-dinh-ham-luong-axit-amin-bang ...

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 12621:2019

PHÂN BÓN - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT AMIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)

Fertilizers - Determination of amino acids content by high performance liquid chromatography method (HPLC)

Lời nói đầu

TCVN 12621:2019 do Viện Quy hoạch và Thiết kế Nông nghiệp biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

PHÂN BÓN - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT AMIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)

Fertilizers - Determination of amino acids content by high performance liquid chromatography method (HPLC)

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng axit amin tự do (tổng hợp và tự nhiên) và axit amin dạng tổng số (liên kết peptit và tự do) trong phân bón bằng thiết b sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) có cột trao đổi ion.

Tiêu chun này áp dụng cho các axit amin sau: tổng của cystin và cystein; methionin; lysin; threonin; alanin; arginin; axit aspartic; axit glutamic; glycin; histidin; iso leucin; leucin; phenylalanin; prolin; serin; tyrosin; valin.

Tiêu chuẩn này không phân biệt giữa các muối của axit amin, cũng không phân biệt các dạng đng phân D và L của axit amin.

Tiêu chuẩn không áp dụng đ xác đnh tryptophan hoặc các chất tương tự axit amin có chứa nhóm hydroxyl.

2  Thuật ngữ và định nghĩa

Tiêu chuẩn này sử dụng thuật ngữ và định nghĩa sau:

2.1

Axit amin tự do (free amino acid)

Nhóm axit amin ưa nước, có liên kết chặt chẽ với môi trường nước và thường tạo liên kết hydro với môi trường và giữa các axit amin với nhau.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Axit amin dạng liên kết peptit (peptide-linked amino acids)

Nhóm axit amin kỵ nước không hoặc khó tan trong nước, do vậy phần lớn các axit amin nằm ở phần nội của protein.

2.3

Axit amin tổng (total amino acids)

Bao gồm axit amin tự do và axit amin dạng liên kết peptit.

3  Nguyên tắc

3.1  Các axit amin tự do

Các axit amin tự do được chiết với dung dịch axit clohydric loãng. Các cht đng chiết xut có phân tử lượng lớn cha nitơ được kết tủa với axit sulfosalicylic và được loại bằng cách lọc. Dịch lọc được điều chỉnh pH tới 2,20. Các axit amin được tách riêng biệt bằng cột trao đổi ion trong thiết bị HPLC và xác định bằng phn ứng với ninhydrin sử dụng detector quang đo bước sóng 570 nm.

3.2  Các axit amin tổng số

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Quá trình oxy hóa được thực hiện ở 0 °C với hỗn hợp axit performic và phenol. Thuốc thử oxy hóa dư được loại bỏ bằng natri sulfit. Mu oxy hóa hoặc không oxy hóa đều được thủy phân trong môi trường axit clohydric 6 mol/L. Dịch thủy phân được điều chnh pH tới 2,20. Các axit amin được tách riêng biệt bằng cột trao đổi ion trong thiết bị HPLC và xác định bằng phản ứng với ninhydrin sử dụng detector quang đo bước sóng 570 nm. (bước sóng 440 nm đối với prolin).

4  Thuốc thử

Trừ khi có quy định khác, trong quá trình phân tích ch sử dụng các hóa chất, thuốc th có cấp độ tinh khiết dùng cho phân tích sắc ký.

4.1  Nước, sử dụng nước cất hai lần hoặc nước có chất lượng tương tự (độ dẫn điện <10 µS).

4.2  Hydro peroxit (H2O2) đậm đặc.

4.3  Axit formic (HCOOH) đậm đặc.

4.4  Axit clohydric (HCl) đậm đặc, d = 1,19 g/mL.

4.5  Natri hydroxit (NaOH) dạng hạt.

4.6  Phenol (C6H5OH) thể rắn.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

4.8  Axit 5-sulfosalicylic (C7H6O2S.2H2O) th rắn.

4.9  Natri citrat (Na3C6H5O7.2H2O) th rn.

4.10 Natri clorua (NaCl) thể rắn

4.11  Natri sulfit (Na2SO3) thể rắn.

4.12  Dung môi 1-octanol (C8H18O)

4.13  Dầu nhẹ, nhiệt độ sôi từ 40 °C đến 60 °C.

4.14  Norleucin, hay bất kỳ chất khác phù hợp để sử dụng làm chất nội chuẩn.

4.15  Khí nitơ 5.0.

4.16  Các axit amin.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

4.16.2  Axitcysteic.

4.16.3  Methionin sulfon.

CHÚ THÍCH 1: Sử dụng các hợp chất tinh khiết không chứa nước kết tinh. Làm khô trong chân không có cha P2O5 hoặc H2SO4 trong 1 tuần trước khi sử dụng.

4.17  Dung dịch natri hydroxit 7,5 mol/L: Hòa tan 300 g natri hydroxit (4.5) trong nước và định mức đến 1000 mL.

4.18  Dung dch natri hydroxit 1 mol/L: Hòa tan 40 g natri hydroxit (4.5) trong nước và định mức đến 1000 mL.

4.19  Hỗn hợp chiết (axit clohydric 0,1 mol/L chứa 2 % thiodiglycol): Hút 8,2 mL axit clohydric đậm đặc (4.4) pha loãng với khoảng 900 mL nước. Thêm 20 mL thiodiglycol (4.7) và định mức đến 1000 ml bằng nước.

CHÚ THÍCH 2: Không trộn trực tiếp axit clohydric đậm đặc (4.4) và thiodiglycol (4.7)

4.20  Dung dịch axit formic-phenol: Trộn 889 g axit formic (4.3) với 111 g nước và thêm 4,73 g phenol (4.6).

4.21  Hn hợp thủy phân (axit clohydric 6 mol/L chứa 1 g phenol): Hòa tan 1 g phenol (4.6) vào 492 mL axit clohydric đậm đặc (4.4) và định mức đến 1000 mL bằng nước.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

4.23  Hỗn hợp oxy hóa (axit performic-phenol)

Trộn 0,5 mL hydro peroxit (4.2) với 4,5 mL hỗn hp axit formic-phenol (4.20) trong cc nh. Gi nhiệt độ trong khoảng 20 °C đến 30 °C trong 1 h nhằm tạo ra axit performic, sau đó làm lạnh trong bể điu nhiệt 0 °C (15 min) trước khi thêm vào mẫu.

CHÚ THÍCH 3: Tránh tiếp xúc với da và nên mặc quần áo bo hộ.

4.24  Đệm citrat (Na+: 0,2 mol/L), pH = 2,20.

Hòa tan 19,61 g natri citrat (4.9), 5 mL thiodiglycol (4.7), 1 g phenol (4.6) và 16,50 ml axit clohydric đậm đặc (4.4) trong khoảng 800 mL nước. Điều chnh pH tới 2,20. Định mc đến 1000 mL bằng nước.

4.25  Đệm rửa giải, chun bị theo các điều kiện của thiết bị phân tích được sử dụng.

4.26  Thuốc thử ninhydrin, chun bị theo các điều kiện của thiết b phân tích được sử dụng.

4.27 Dung dịch chuẩn của các axit amin

4.27.1 Dung dịch chuẩn gốc axit amin (theo Điều 1) có nng độ là 2,5 µmol/mL trong axit HCl.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

4.27.2  Dung dịch chuẩn gc axit cysteic và methionin sulfon, 1,25 µmol/mL.

Hòa tan 0,2115 g axit cysteic (4.16.2) và 0,2265 g methionin sulfon (4.16.3) trong đệm citrat (4.24) vào bình định mức dung tích 1000 mL và định mức đến vạch bằng đệm citrat.

CHÚ THÍCH 4: Các dung dịch chuẩn được bảo quản dưới 5 °C không quá 12 tháng. Dung dch này không nên dùng nếu dung dịch chun gốc (4.27.1) có cha axit cysteic và methionin suIfon.

4.27.3  Dung dịch chuẩn gốc và chất nội chuẩn, ví dụ như norleucin 20 µmol/mL.

Hòa tan 0,6560 g norleucin (4.14) trong đệm citrat (4.24) vào bình định mức dung tích 250 mL và định mức đến vạch bằng đệm citrat. Bảo quản dưới 5 0°C không quá 6 tháng.

4.27.4  Dung dịch chuẩn làm việc của các cht chuẩn axit amin, sử dụng cho các dịch thủy phân, axit cysteic và methionin sulfon có nng độ 0,1 µmol/mL và các axit amin khác là 0,2 µmol/mL.

Hòa tan 2,2 g natri clorua (4.10) trong cốc dung tích 100 mL với 30 mL đệm citrat (4.24). Thêm 4,00 mL dung dịch chun gốc axit amin (4.27.1), 4,00 mL dung dịch chuẩn gốc axit cysteic và methionin sulfon (4.27.2), và 0,50 mL chun gốc của dung dịch nội chun (4.27.3) nếu cn sử dụng. Điều chnh pH tới 2,20 bằng dung dịch natri hydroxit 1 mol/L (4.18). Chuyển định lượng vào bình định mức dung tích 50 mL và định mức bằng đệm citrat (4.24), trộn đều. Bảo quản dưới 5 °C không quá 3 tháng.

4.27.5  Dung dịch hiệu chuẩn của các chất chuẩn axit amin

Đối với đường chuẩn của các axit amin (Điều 1) sử dụng các dịch chiết được chuẩn bị theo (6.2) và với dịch thủy phân được chuẩn bị theo 6.3.2

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

5  Thiết bị và dụng cụ

Sử dụng các thiết bị dụng cụ thông thường trong phòng thí nghiệm và các dụng cụ, thiết bị sau:

5.1 Bình cầu đáy tròn, dung tích 100 mL hoặc 250 mL có sinh hàn hồi lưu.

5.2  Bình thy tinh bosilicat, dung tích 100 mL với nắp bằng cao su/teflon (ví dụ: Duran, Schott) chịu nhiệt.

5.3  T sấy, có điều khiển nhiệt độ.

5.4  Thiết bị đo pH, đọc được đến ba s thập phân.

5.5  Màng lọc, 0,2 µm.

5.6  Máy ly tâm.

5.7  Bộ cất quay chân không.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

5.9  Rây 0,25 mm.

5.10 Bể điều nhiệt.

5.11  Thiết bị HPLC có cột trao đổi ion, thiết bị dẫn suất sau cột cho ninhydrin và detector quang.

Cột được nhồi với các hạt nhựa polystyren đã được sulfonat hóa có khả năng tách axit amin ra khỏi nhau và khỏi các chất khác dương tính với ninhydrin. Tốc độ dòng của dung dịch đệm và ninhydrin được điều chỉnh bằng bơm để có tốc độ dòng n định ± 0,5 % trong suốt quá trình chạy đường chuẩn và phân tích mẫu.

Đối với một số thiết bị, quá trình thủy phân có thể được sử dụng mà trong đó dịch thủy phân có nng độ natri 0,8 mol/L và chứa tất cả lượng axit formic dư từ bước oxy hóa. Một số thiết b khác sẽ không tách tốt một số axit amin nhất định nếu dung dịch thủy phân chứa nng độ axit formic quá dư và/hoặc nng độ ion natri cao. Trong trường hợp này, giảm thể tích axit bằng cách làm bay hơi tới xấp x 5 mL sau khi thủy phân và trước khi điều chỉnh pH. Quá trình bay hơi nên thực hiện trong điều kiện chân không nhiệt độ không vượt quá 40 °C.

6  Cách tiến hành

6.1  Chuẩn bị mẫu thử

6.1.1  Phân bón dạng rắn

Nghiền mẫu cho đến khi lt qua lỗ sàng 0,25 mm. Các mẫu có độ ẩm cao sẽ được sy khô bằng không khí nhiệt độ không quá 50 °C hoặc đông khô trước khi nghiền. Các mẫu có hàm lượng chất béo cao sẽ được chiết với dầu nhẹ (4.13) trước khi nghiền.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Dạng dung dịch: Mẫu lấy ban đầu không ít hơn 50 mL, trước khi lấy mẫu để tiến hành phép thử mẫu phải được lắc đều.

Dạng lỏng sền sệt: Mu ly ban đầu không ít hơn 200 g, trước khi lấy mẫu để tiến hành phép th, mẫu phải được trộn đều.

6.2  Xác định các axit amin tự do

Cân một lượng mẫu phân bón phù hợp (1 g đến 5 g) chính xác đến 0,0001 g đã được chuẩn bị theo (6.1) vào bình tam giác và thêm 100 mL của hỗn hợp dịch chiết (4.19). Lắc đều trong 60 min, sử dụng máy lắc hoặc máy khuấy từ. Đ cho lắng cặn rồi dùng pipet hút 10 mL dung dịch phía trên cho vào cốc có mỏ dung tích 100 mL.

CHÚ THÍCH 5: Lượng mẫu cân nên cha lượng nitơ khoảng 10 mg và lượng nước không vượt quá 100 mg; Lượng mẫu cn chuẩn b được tính toán như sau:

trong đó:

Ns là lượng nitơ trong mẫu thử, tính bằng phần trăm (%);

Ws là khối lượng của phần mẫu th tương đương với lượng nitơ khoảng 10 mg, tính bằng miligam (mg).

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Nếu sử dụng cht nội chuẩn, thêm 1,00 mL dung dịch nội chuẩn (4.27.3) cho mi 100 mL dịch cuối và định mức đến vạch bằng dung dịch đệm citrat (4.24).

Chạy sắc ký tiếp theo 6.4

Nếu dịch chiết không được sử dụng cùng ngày thì phi bo quản nhiệt độ dưới 5 °C.

6.3  Xác định các axit amin tổng số

6.3.1  Quá trình oxy hóa

Cân một lưng mu phân bón phù hợp (1 g đến 5 g) chính xác đến 0,0001 g đã được chun bị theo (6.1) cho vào

- Bình tam giác dung tích 100 mL để thủy phân hở (6.3.2.3), hoặc

- Bình tam giác dung tích 250 mL nếu yêu cầu nng độ natri thấp (6.3.3.2) hoặc

- Bình dung tích 100 mL có nút nhám đậy đ thủy phân kín (6.3.2 4).

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Quy trình tiếp tục theo 6.3.2.1.

6.3.2  Quá trình thủy phân

6.3.2.1 Thủy phân mẫu đã được oxy hóa

Đi với mẫu đã oxy hóa được chun bị như 6.3.1, thêm 25 mL hỗn hợp thủy phân (4.21), tráng cẩn thận bình mẫu để lấy hết lượng mẫu còn bám trên thành bình và que khuấy. Tùy thuộc vào quá trình thủy phân được sử dụng, quy trình được thực hiện theo các bước nêu tại 6.3.2.3 hoặc 6.3.2.4.

6.3.2.2 Thủy phân các mẫu chưa được oxy hóa

Cân một lượng mẫu phân bón phù hợp (1 g đến 5 g) chính xác đến 0,0001g đã được chuẩn bị theo (6.1) cho vào bình tam giác dung tích 100 mL hoặc 250 mL hoặc vào bình có nắp đậy dung tích 100 mL. Phần mẫu th được cân nên chứa khoảng 10 mg nitơ (theo CHÚ THÍCH 5). Thêm cẩn thận vào bình 25 mL hỗn hợp thủy phân (4.21) và trộn đều mẫu. Quy trình được tiếp tục thực hiện theo các bước 6.3.2.3 hoặc 6.3.2.4.

6.3.2.3 Thủy phân h

Thêm ba viên thủy tinh trợ sôi vào bình đựng mẫu (đã được chuẩn bị 6.3.2.1 hoặc 6.3.2.2) và đun hi lưu liên tục trong 23 h. Khi quá trình thủy phân kết thúc, rửa sinh hàn từ trên xung bằng 5 mL dung dịch đệm citrat (6.24). Tháo bình mẫu và làm lạnh trong bể điều nhiệt 0 °C. Quá trình tiếp tục thực hiện theo 6.3.3.

6.3.2.4 Thủy phân kín

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Tùy thuộc vào quá trình điều chỉnh pH (6.3.3), chuyển định lượng mẫu trong bình sang bình tam giác dung tích 250 mL hoặc bình cầu đáy tròn dung tích 250 mL sử dụng dung dịch đệm citrat (4.24).

Tiến hành tiếp tục theo 6.3.3.

6.3.3 Điều chnh pH

6.3.3.1 Tùy thuộc vào mức độ dung nạp natri của thiết bị sử dụng đ phân tích axit amin, quá trình tiếp tục được thực hiện theo 6.3.3.2 hoặc 6.3.3.3 để điều chỉnh pH.

6.3.3.2 Khi thiết bị phân tích axit amin đòi hi nng độ natri thấp (thì th tích axit phải giảm xuống) và đi với hệ thng cột trao đổi ion cũng yêu cầu độ natri thấp, thì nên sử dụng dung dịch chuẩn gốc của chất nội chuẩn (4.27.3).

Trong trường hợp này, thêm 2,00 mL dung dịch chuẩn gốc của chất nội chuẩn (4.27.3) để thủy phân trước khi làm bay hơi. Thêm 2 giọt dung dịch 1-octanol (4.12) vào dung dịch thủy phân thu được từ 6.3.2.3 hoặc 6.3.2.4.

Sử dụng thiết bị cất quay chân không để làm giảm thể tích xuống 5 mL đến 10 mL dưới điều kiện chân không 40 °C. Nếu thể tích dung dịch còn dưới 5 mL, mẫu thủy phân phải b đi và thực hiện lại quá trình phân tích từ đầu.

Điều chnh pH đến 2,20 bằng dung dịch natri hydroxit 1 mol/L (4.18) và thực hiện theo 6.3.2.4.

6.3.3.3 Đối với hệ thng cột trao đổi ion không yêu cầu nng độ natri thấp, lấy mẫu thủy phân thu được theo 6.3.2.3 và 6.3.2.4 và trung hòa từ từ, cn thận bằng cách thêm 17 mL dung dịch natri hydroxit 7,5 mol/L (4.17), sử dụng máy khuấy từ, trong suốt quá trình này nhiệt độ phải luôn được giữ mức dưới 40 °C.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

6.3.3.4  Dung dịch mẫu thử cho chạy sắc ký

Chuyển toàn bộ lượng dịch thủy phân đã điều chỉnh pH (6.3.3.2 hoặc 6.3.3.3) cùng dung dịch đệm citrat (4.24) vào bình định mức dung tích 200 mL và đnh mức đến vạch mức bằng dung dịch đệm.

Nếu chất nội chuẩn không có sẵn, thêm 2 mL dung dịch chuẩn gốc của chất nội chuẩn (4.27.3) và định mức đến vạch mức bng dung dịch đệm citrat (4.24). Trộn đều cn thận.

Thực hiện bước chạy sắc ký (6.4)

Nếu dung dịch mẫu không được thực hiện trong cùng ngày, mẫu phải được bo quản dưới 5 °C.

6.4  Chạy sắc ký

Trước khi thực hiện chạy sắc ký, đưa dịch chiết (6.2) hoặc dịch thủy phân (6.3.3.4) v nhiệt độ phòng. Lắc đều hỗn hợp và lọc một lượng phù hợp qua màng lọc cỡ 0,2 µm. Đưa dịch lọc sạch vào cột trao đổi ion, sử dụng thiết bị HPLC.

Bơm mẫu có thể thực hiện bằng tay hoặc tự động. Điều quan trọng là đưa lên cột phân tích cùng một lượng dung dch chất chuẩn và mẫu thử không sai khác quá 0,5 % trừ khi chất nội chuẩn được sử dụng, tỷ lệ giữa lượng natri:axit amin trong chất chuẩn và dung dịch mẫu là tương tự nhau thì mới có thể thực hiện được.

Nói chung, tần suất chạy dung dịch chuẩn phụ thuộc độ ổn định của thuốc thử ninhydrin và hệ thống phân tích. Pha loãng chất chuẩn hoặc mẫu vi dung dịch đệm citrat (4.24) để có được diện tích pic của chất chuẩn vào khoảng 30 % đến 200 % diện tích pic mẫu axit amin.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Trong suốt quá trình chạy sắc ký, tỷ số giữa chiều cao lõm:pic đề cập dưới đây được áp dụng khi dung dịch có cùng nng độ mol (của các axit đang xác định) được phân tích. Dung dịch axit amin cùng nng độ mol này cha ít nhất 30 % của lượng axit amin tải tối đa của mỗi axit amin mà có thể đo được chính xác.

Để tách threonin và serin, tỷ số giữa chiều cao lõm:pic của pic thấp hơn trong hai axit amin chng lên nhau trong sắc ký đồ không vượt quá 2:10 (nếu chỉ cystein, methionin và lysin được xác định, sự tách không rõ ràng giữa các pic liền kề sẽ gây sai số đến phép đo). Đối với tất cả các axit amin t số tách tốt hơn nên là 1:10.

Hệ thống nên đảm bảo rằng lysin được tách khỏi "lysin nhân tạo" và ornithin.

7  Biểu thị kết quả

Diện tích pic của mẫu và chất chuẩn được đo cho mỗi axit amin và lượng mẫu được tính theo gam axit amin /kilogam mẫu, được tính theo công thức (1):

 (1)

Nếu chất nội chuẩn được sử dụng, thì nhân với

trong đó

Ae là diện tích pic của chất trong dịch thủy phân;

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Aie là diện tích pic của chất nội chuẩn trong dịch thủy phân;

Aic là diện tích pic của chất nội chun trong dung dịch chun hiệu chun;

M là khối lượng phân tử của axit amin được xác định;

C là nng độ của chất chuẩn, µmol/mL;

m là khối lượng mẫu, tính bằng g (tính về khối lượng ban đầu nếu mẫu được làm khô hoặc loại chất béo);

Ve là tng th tích của dịch thủy phân (6.3.3.4) hoặc tổng th tích pha loãng của dch chiết (6.2), tính bằng mililit.

Cả cystin và cystein được xác định giống như axit cysteic trong thủy phân mẫu đã oxy hóa, nhưng được tính theo tổng của cystein và cystin sử dụng M = 120,15 g (= 0,5 x 240,30) (C6H12N2O4S2, M = 240,30 g).

Methionin được xác đnh như methionin sulfon trong thủy phân mẫu đã được oxy hóa, nhưng tính toán bằng cách sử dụng M của methionin = 149,21 g.

Methionin tự do thêm vào được xác định sau khi chiết tách như methionin; tính toán tương tự sử dụng cùng chung M.

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

 (2)

trong đó

Vef là thể tích chiết cuối cùng, tính bằng mililit.

Các kết quả có thể chuyển đổi sang phần trăm (%):

Kết quả tính theo % = 0,1 x kết quả tính theo gam trên kilogam.

8  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm bao gồm ít nhất những thông tin sau:

a) Viện dẫn tiêu chuẩn này;

b) Đặc điểm nhận dạng mẫu;

...

...

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

d) Mọi thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc dược coi là tùy chọn và các yếu tố có thể nh hưng đến kết quả th nghiệm;

e) Ngày th nghim.

Từ khóa » Tiêu Chuẩn Axit