Bài Giảng Kỹ Thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) - Thư Viện Tài Liệu

Có thể bạn quan tâm

Trang chủ
Đăng ký
Đăng nhập
Liên hệ

Thư viện tài liệu

Thư viện tài liệu trực tuyến lớn nhất, tổng hợp tài liệu nhiều lĩnh vực khác nhau như Kinh tế, Tài chính, Ngân hàng, CNTT, Ngoại ngữ, Khoa học...

Bài giảng Kỹ thuật PCR (Polymerase chain reaction)

Tài liệu Bài giảng Kỹ thuật PCR (Polymerase chain reaction): BAỉI 2KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction) Phương phỏp PCR là phương phỏp khuếch đại nhanh nhiều bản sao của cỏc đoạn DNA mà khụng cần phải qua tạo dũng. Phương phỏp này được K.Mullis đưa ra năm 1985 và Saiki hoàn thiện năm 1988. I. NGUYấN TẮC CỦA PHƯƠNG PHÁP PCR là phản ứng nhõn bản trỡnh tự DNA quan tõm trong ống nghiệm. Phương phỏp này được thực hiện in-vitro với sự hiện diện của enzyme DNA-polymerase. Sự khuếch đại được thực hiện nhờ cỏc chu trỡnh nhiệt được lặp lại. P C R II. CÁC THÀNH PHẦN CẦN THIẾT ĐỂ THỰC HIỆN PHẢN ỨNG Sợi khuôn (DNA hoặc cDNA) Các mồi (Oligonucleotide primers) DNA polymerase chịu nhiệt (Taq) dNTP’s Dung dịch đệm Ion Mg++ III. TIẾN HÀNH PHẢN ỨNG 1. Biến tính ADN: 94-95oC, 30-60 giây. 2. Bắt cặp của mồi vào sợi khuôn: 45-60oC, 30-60 giây. 3. Phản ứng kéo dài chuỗi: 72oC, 60 giây/1kb. 3 bước trên hình thành 1 chu kỳ. Phản ứng PCR được tiến hành trong khoảng 25-40 chu kỳ. Trong kỹ thuật PCR thông thường người ta thực hiện bước biến tính ADN trước khi bước v...

15 trang | Chia sẻ: haohao | Lượt xem: 2582 | Lượt tải: 3

Bạn đang xem nội dung tài liệu Bài giảng Kỹ thuật PCR (Polymerase chain reaction), để tải tài liệu về máy bạn click vào nút DOWNLOAD ở trênBAØI 2KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction) Phương pháp PCR là phương pháp khuếch đại nhanh nhiều bản sao của các đoạn DNA mà không cần phải qua tạo dòng. Phương pháp này được K.Mullis đưa ra năm 1985 và Saiki hoàn thiện năm 1988. I. NGUYÊN TẮC CỦA PHƯƠNG PHÁP PCR là phản ứng nhân bản trình tự DNA quan tâm trong ống nghiệm. Phương pháp này được thực hiện in-vitro với sự hiện diện của enzyme DNA-polymerase. Sự khuếch đại được thực hiện nhờ các chu trình nhiệt được lặp lại. P C R II. CÁC THÀNH PHẦN CẦN THIẾT ĐỂ THỰC HIỆN PHẢN ỨNG Sîi khu«n (DNA hoÆc cDNA) C¸c måi (Oligonucleotide primers) DNA polymerase chÞu nhiÖt (Taq) dNTP’s Dung dÞch ®Öm Ion Mg++ III. TIẾN HÀNH PHẢN ỨNG 1. BiÕn tÝnh ADN: 94-95oC, 30-60 gi©y. 2. B¾t cÆp cña måi vµo sîi khu«n: 45-60oC, 30-60 gi©y. 3. Ph¶n øng kÐo dµi chuçi: 72oC, 60 gi©y/1kb. 3 bíc trªn h×nh thµnh 1 chu kú. Ph¶n øng PCR ®îc tiÕn hµnh trong kho¶ng 25-40 chu kú. Trong kü thuËt PCR th«ng thêng ngêi ta thùc hiÖn bíc biÕn tÝnh ADN tríc khi bíc vµo chu kú. Bíc nµy thêng ®îc thùc hiÖn ë 94-95oC, 2-3 phót. Ph¶n øng PCR - bíc b¾t cÆp cña c¸c måi vµo sîi khu«n 5’ 3’ 5’ 3’ 45 - 60ºC Ph¶n øng PCR - bíc kÐo dµi chuçi 72ºC 5’ 3’ 3’ 5’ Ph¶n øng PCR - s¶n phÈm ®îc h×nh thµnh sau 3 bíc 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ B¾t cÆp & kÐo dµi chuçi BiÕn tÝnh S¶n phÈm cuèi cïng cña ph¶n øng PCR IV. LỢI ÍCH CỦA PHẢN ỨNG PCR Thời gian thực hiện rất nhanh. Chỉ cần khoảng 3 giờ để khuếch đại trình tự DNA trong khi với phương pháp tạo dòng ta mất khoảng 1 tuần; Đơn giản và ít tốn kém; Độ tinh sạch của mẫu không cần cao; V. CÁC ỨNG DỤNG CỦA KỸ THUẬT PCR 1. Nhân phân tử RNA bằng kỹ thuật PCR Cần có các đoạn mồi kết hợp được với khuôn RNA, sau đó tổng hợp các phân tử DNA nhờ enzyme reverse trancriptase theo kỹ thuật PCR. Enzyme Tth DNA-polymerase có thể thực hiện cả phản ứng sao chép ngược và phản ứng tăng số lượng. Quá trình này cần có ion mangan. 2. Kỹ thuật RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) Kỹ thuật RAPD được thực hiện theo các bước sau: Tách chiết DNA tổng số, nhân DNA bằng máy PCR; Điện di trên gel; Xác định tính đa dạng di truyền bằng các phần mềm thông dụng. Các số liệu thu được cho thấy sự gần gũi hoặc cách biệt di truyền của các mẫu nghiên cứu. VI. CÁC HẠN CHẾ CỦA PHƯƠNG PHÁP PCR 1. Kích thước của trình tự cần khuếch đại Trừ vài trường hợp rất cá biệt, phương pháp PCR không hoạt động được với những đoạn DNA lớn hơn 3kb. Việc sử dụng PCR đối với các độ dài dưới 1,5 kb cho kết quả tốt. 2. Sự ngoại nhiễm. 3. Các sai sót gây ra do Taq polymerase. Sự sao chép bởi Taq polymerase cho tỷ lệ sai khá cao (10-4)

Các file đính kèm theo tài liệu này:

BAI 2 - PCR.ppt

Tài liệu liên quan

Báo cáo Giáo dục bảo vệ và phát triển bền vững môi trường cho học sinh trung học phổ thông
25 trang | Lượt xem: 1526 | Lượt tải: 0
Báo cáo ứng dụng sắc kí khí
10 trang | Lượt xem: 3241 | Lượt tải: 3
Đồ án Tính toán thiết kế trạm xử lý nước thải công ty bia Hà Nội - Quảng Bình
88 trang | Lượt xem: 1463 | Lượt tải: 0
Luận văn ́Nghiên cứu thử nghiệm sản phẩm nước linh chi đóng chai
78 trang | Lượt xem: 1977 | Lượt tải: 0
Đề tài Ứng dụng của sắc kí hấp phụ hiệu năng cao
36 trang | Lượt xem: 2315 | Lượt tải: 0
Đề tài Types of PCR and their applications
60 trang | Lượt xem: 2050 | Lượt tải: 1
Tiểu luận Điều kiện cân bằng, điều kiện tự diễn biến của các quá trình hoá học theo quan điểm của nhiệt động học. áp dụng cho quá trình tổng hợp NH3 trong công nghiệp
15 trang | Lượt xem: 1905 | Lượt tải: 0
Đề tài Tiêu chuẩn và quy chuẩn trong quản lý môi trường
39 trang | Lượt xem: 1652 | Lượt tải: 0
Báo cáo Các phương pháp lai phân tử
19 trang | Lượt xem: 1827 | Lượt tải: 3
Bài giảng Ứng dụng của xử lý văn bản
8 trang | Lượt xem: 1629 | Lượt tải: 0