Bai Giảng PCR - Bài Giảng Khác - Lê Quốc Hội

Đăng nhập / Đăng ký

• ViOLET.VN
• Bài giảng
• Giáo án
• Đề thi & Kiểm tra
• Tư liệu
• E-Learning
• Kỹ năng CNTT
• Trợ giúp

Thư mục

Các ý kiến mới nhất

ĩ thuật 3: KHU VƯỜN NHỎ- BÀI 1: CÂY TRONG...

https://www.youtube.com/watch?v=SfSaIZvpiqo  " Thí nghiệm xác định khối lượng riêng của một...

Toàn bộ các thí nghiệm KHTN 6,7,8,9 . Thầy, cô...

mcf168com1...

gameblog...

CTST-TUẦN 25-BÀI 6 T3 VIẾT...

CTST-TUẦN 25-BÀI 6 T2 NÓI VÀ NGHE...

CTST-TUẦN 25-BÀI 6 T1 MỘT BẢN HÙNG CA...

CTST-TUẦN 25-BÀI 5 T4 VIẾT...

CTST-TUẦN 25-BÀI 5 T3 LUYỆN TẬP VỀ ĐIỆP TỪ, ĐIỆP...

CTST-TUẦN 25-BÀI 5 T1+2 ĐỌC ÔNG TRẠNG NỒI...

KNTT-TUẦN 25-T4.DOCMORONG...

KNTT-TUẦN 25-T3.VIETCTHOATDONG...

KNTT-TUẦN 25-T1.2.DOC-Đường quê Đồng Tháp Mười...

Các ý kiến của tôi

Thành viên trực tuyến

336 khách và 84 thành viên

Nguyễn Thị Tuyết Nhung

Ngô Thị Liền

Nguyễn Quang Bình

Nguyễn Thị Thúy Nhung

Hong Phu Chau

Lê Thị Cúc

Lê Văn Thuyết

đinh thị minh tâm

Lê Doãn Nhật

Phan Thi Sau

Trần Văn Hiền

Nguyễn Công Luận

Trần Thị Kim Hoa

Thịnh Thuận

ngô thị thảo

Dá Đà

Phan Thuy Linh

Hà Văn Nhương

nguyễn thị linh

Be Titi

Tìm kiếm theo tiêu đề

Đăng nhập

Tên truy nhập Mật khẩu Ghi nhớ   Quên mật khẩu ĐK thành viên

Tin tức cộng đồng

5 điều đơn giản cha mẹ nên làm mỗi ngày để con hạnh phúc hơn

Tìm kiếm hạnh phúc là một nhu cầu lớn và xuất hiện xuyên suốt cuộc đời mỗi con người. Tác giả người Mỹ Stephanie Harrison đã dành ra hơn 10 năm để nghiên cứu về cảm nhận hạnh phúc, bà đã hệ thống các kiến thức ấy trong cuốn New Happy. Bà Harrison khẳng định có những thói quen đơn...

Hà Nội công bố cấu trúc định dạng đề minh họa 7 môn thi lớp 10 năm 2025

23 triệu học sinh cả nước chính thức bước vào năm học đặc biệt

Xem tiếp

Tin tức thư viện

Chức năng Dừng xem quảng cáo trên violet.vn

Kính chào các thầy, cô! Hiện tại, kinh phí duy trì hệ thống dựa chủ yếu vào việc đặt quảng cáo trên hệ thống. Tuy nhiên, đôi khi có gây một số trở ngại đối với thầy, cô khi truy cập. Vì vậy, để thuận tiện trong việc sử dụng thư viện hệ thống đã cung cấp chức năng...

Khắc phục hiện tượng không xuất hiện menu Bộ công cụ Violet trên PowerPoint và Word

Thử nghiệm Hệ thống Kiểm tra Trực tuyến ViOLET Giai đoạn 1

Xem tiếp

Hướng dẫn sử dụng thư viện

Xác thực Thông tin thành viên trên violet.vn

Sau khi đã đăng ký thành công và trở thành thành viên của Thư viện trực tuyến, nếu bạn muốn tạo trang riêng cho Trường, Phòng Giáo dục, Sở Giáo dục, cho cá nhân mình hay bạn muốn soạn thảo bài giảng điện tử trực tuyến bằng công cụ soạn thảo bài giảng ViOLET, bạn...

Bài 4: Quản lí ngân hàng câu hỏi và sinh đề có điều kiện

Bài 3: Tạo đề thi trắc nghiệm trực tuyến dạng chọn một đáp án đúng

Bài 2: Tạo cây thư mục chứa câu hỏi trắc nghiệm đồng bộ với danh mục SGK

Bài 1: Hướng dẫn tạo đề thi trắc nghiệm trực tuyến

Lấy lại Mật khẩu trên violet.vn

Kích hoạt tài khoản (Xác nhận thông tin liên hệ) trên violet.vn

Đăng ký Thành viên trên Thư viện ViOLET

Tạo website Thư viện Giáo dục trên violet.vn

Hỗ trợ trực tuyến trên violet.vn bằng Phần mềm điều khiển máy tính từ xa TeamViewer

Xem tiếp

Hỗ trợ kĩ thuật

• (024) 62 930 536
• 0919 124 899
• [email protected]

Liên hệ quảng cáo

• (024) 66 745 632
• 096 181 2005
• [email protected]

Đưa bài giảng lên Gốc > THCS (Chương trình cũ) > Sinh học > Bài giảng khác >

• bai giảng PCR
• Cùng tác giả
• Lịch sử tải về

bai giảng PCR

• 
• 
• 
• 
• 
• 
• 0 / 0
• 

Nhấn vào đây để tải về Báo tài liệu có sai sót Nhắn tin cho tác giả (Tài liệu chưa được thẩm định) Nguồn: Người gửi: Lê Quốc Hội Ngày gửi: 16h:04' 10-12-2012 Dung lượng: 1.0 MB Số lượt tải: 119 Số lượt thích: 0 người TRƯỜNG CAO ĐẲNG CÔNG NGHIỆP TUY HÒAKHOA CÔNG NGHỆ HÓATên bài giảng: PHƯƠNG PHÁP PCRGiáo viên : LÊ QUỐC HỘI1.Khái quát chung về PCR1.1 Khái niệm- PCR (Polymerase chain reactions) là một phương pháp tạo dòng in vitro nhằm khuyếch đại (tạo ra nhiều bản sao) một đoạn DNA trong ống nghiệm mà không cần sử dụng các sinh vật sống..PCR được phát minh năm 1985Giải Nobel Hóa học 1993Kary Mullis- Tách dòng gene. - Xác định huyết thống, truy tìm dấu vết tội phạm- Chuẩn đoán những bệnh- Xác định các đoạn trình tự cần nghiên cứu- Phát hiện đột biến- Nghiên cứu quá trình tiến hoá phân tử- Phục hồi các gen đã tồn tại hàng triệu năm- Chọn giống vật nuôi, cây trồng- Xác định các loài mới, các loài đặc hữu - Là kỹ thuật nền cho các kỹ thuật khác như: RAPD, SSR…1.Khái quát chung về PCR1.2. Ứng dụngTạo dòng gen sử dụng Plasmid 1.Khái quát chung về PCR1.2. Ứng dụng2. Nguyên tắc và quy trình PCR2.1 Nguyên tắc PCR+ Dùng nhiệt độ cao tháo xoắn thay cho enzim helicase.+ Kết hợp với enzim DNA polymerase chịu nhiệt để tổng hợp DNA mới trong môi trường thích hợp.+ Hệ thống điều nhiệt thích hợp cùng với các đoạn mồi được thiết kế chuyên biệt, chủ động.- Tổng hợp DNA ngoài cơ thể cũng tuân thủ những nguyên tắc cơ bản của sao chép DNA trong cơ thể nhưng có sự khác biệt:2. Nguyên tắc và quy trình PCR2.2 Quy trình PCRBiến tính94-96 °CMẫu DNA và mồi được phân tách hoàn toàn và chỉ còn dạng sợi đơn.30s-1 phútGắn mồi 30s-1 phút40-70 °CMồi bắt cặp với khuôn theo chiều 5/-3/DNA polymerase gắn tiếp vào đoạn mồi. Nó bắt đầu bám vào và hoạt động dọc theo sợi DNA, tổng hợp chuỗi DNA mới giống chuỗi DNA gốc.720 CKéo dài 30s đến nhiều phútTổng hợp hay kéo dài2. Nguyên tắc và quy trình PCR2.2 Quy trình PCRLượng bản sao tăng theo cấp số nhân2  4  8  16  32  64 128  256  512  10282. Nguyên tắc và quy trình PCR2.2 Quy trình PCR4.1Thành phần phản ứngBufferỔn định pH DNA khuôn MồiXuôi và NgượcNucleotidesĐể tổng hợp DNAMen polymeraseTaq polymeraseMgCl2 Tăng hoạt lực của men Cần nhiệt độ chính xácMáy PCRTự động điều chỉnh nhiệt độ theo chu kỳ3. Các yêu cầu trong PCR3.1 Thành phần môi trường* Nước- Nước sử dụng cho phản ứng PCR phải thật tinh khiết, không chứa ion nào, không chứa DNAase, RNAase, enzim cắt giới hạn…3. Các yêu cầu trong PCR3.1 Thành phần môi trường- Là mẫu DNA mà chúng ta sẽ khuếch đại. Có thể là DNA kép, đơn, hoặc RNA được tách chiết từ các đối tượng nghiên cứu. DNA khuôn có độ nguyên vẹn cao, thật tinh sạch tránh lẫn tạp chất.Mồi PCRTại sao cần có mồi PCR Polymerase chỉ có thể bắt đầu quá trình tổng hợp từ sợi đôiBắt đầu tại nơi mồi gắn vào Mồi PCR là gì?Các đoạn DNA ngắn, được tổng hợp nhân tạo18-28 NuTương ứng với DNA khuônTm=(GC)*4+(AT)*23. Các yêu cầu trong PCR3.1 Thành phần môi trường- Mồi là những đoạn DNA sợi đơn ngắn và cần thiết cho việc xúc tiến phản ứng dây chuyền tổng hợp DNA. Chúng nhận ra phần DNA cần được nhân lên, bắt cặp bổ sung với một đầu của DNA mẫu và tạo ra vị trí bắt đầu tái bản. Các mồi này có chiều ngược nhau, bao gồm một mồi xuôi và một mồi ngược.- Trong phương pháp PCR, đoạn mồi có hai vai trò chính : + Khởi động men polymerase vì men polymerase chỉ có thể bắt đầu tổng hợp sợi bổ sung cho chuỗi DNA đích một khi nó nhận dạng được đầu 3’ (là đầu mà nó xúc tác cho một dNTP được gắn vào) đang ở tình trạng sợi đôi+ Quyết định nên tính đặc hiệu của sản phẩm PCR, vì nếu đoạn mồi được chọn càng đặc hiệu cho chuỗi đích, nghĩa là chỉ có thể bắt cặp trên chuỗi đích mà không thể bắt cặp được trên các chuỗi DNA khác ngoài chuỗi đích, thì sản phẩm PCR càng đặc hiệuThermus aquaticus Vi khuẩn Thermus aquaticus được phát hiện lần đầu tiên ở một con suối nước nóng ở khu vực Great Fountain của the Lower Geyser Basin tại công viên quốc gia Yellowstone. Taq polymerase được tách chiết từ vi khuẩn nàyTaq polymerase cần 30-60s để tổng hợp 1 kilo base. Vì vậy thời gian kéo dài phụ thuộc vào kích thước sản phẩmHoạt động của men DNA polymerase luôn theo hướng 5’ 3’3’5’3’5’5’5’3’3’Điều kiện PCR chuẩn Hầu hết DNA có thể được khuếch đại dưới điều kiện chuẩn Thành phần cho phản ứng 100 µL DNA khuôn 103 – 104 phân tử Mồi 0,2 uM mỗi mồi MgCl2 1.5 mM dNTP 50 µM mỗi loại Taq DNA polymerase 2 unitsChương trình PCR 30-40 chu kỳ: Biến tính 94ºC, 30 giây Mồi bắt cặp 55ºC, 30 giây Kéo dài 72ºC, 30 giây Chu kỳ cuối: kéo dài lần cuối ở 72ºC, 5 phútKinh nghiệm PCRKhông bao giờ pha 1 phản ứng PCR duy nhấtNên chuẩn bị hỗn hợp chủ (master mix) Buffer, mồi, MgCl2, nước, dNTPs, TaqKhi tính thể tích master mix, nên trừ hao thêm 1 mẫu vì hao hụt trong quá trình hút bằng pipetChứng âmKhông có DNA khuônKiểm tra sự nhiễmChứng dươngĐể kiểm tra hoạt động của mix phaĐiện đi: http://207.207.4.198/pub/flash/4/4.htmlCác vần đề thường gặp khi làm PCRNhiễmKhông có sản phẩm hoặc nồng độ sản phẩm yếuMồi tự bắt cặpSản phẩm phụVấn đề tệ nhất – NHIỄM Sự sao chép quá mức DNA khuônQuá nhạyMột lượng rất nhỏ chất nhiễm có thể gây ra nhiều trục trặcThủ phạm chính Sản phẩm PCRCác đoạn DNA ngắn hoàn toàn tương ứngNồng độ quá caoCó thể lấn át khuôn DNA mớiGiải pháp cho vấn đề nhiễmDùng hóa chất tiệt trùngTách khu vực tiền PCR và hậu PCRLuôn dùng chứng âmChia hóa chất thành nhiều ống nhỏCó thể bỏ đi khi có trục trặcDùng đầu côn lọcHút cẩn thận bằng pipetSản phẩm không có hoặc yếuQuên một thành phần nào đóKiểm tra lại sổ thí nghiệmLặp lại thí nghiệmNồng độ saiDNA khuônMồiTaqMgCl2Sai mồiKiểm tra trình tự Thay mồi khácDùng chứng dươngMẫu DNA không tốtKiểm tra mẫu trên gel agaroseXem sự tách đoạnChất ức chế PCR Bổ sung quá nhiềuĐiều kiện phản ứng saiGiảm tính chính xácGiảm nhiệt độ bắt cặpTăng lượng MgCl2Nhuộm không tốt Kiểm tra hình ảnhDùng thang chuẩnMồi tự bắt cặpMồi tự bắt cặp với nhauSản phẩm nhỏ 50-100 bpThường do vần đề DNA khuônMồi luôn cố gắn vào trình tự nào đóGiải phápChứng dươngThiết kế lại mồiDùng Hot StartDimerHairpin loopsSản phẩm không đặc hiệuCách phát hiệnĐiện di trên gel agaroseKích thước sản phẩm saiLuôn dùng thang chuẩnBiết kích thướcGiải phápTăng độ chính xácTăng nhiệt độ bắt cặpGiảm lượng MgCl2Thay đổi chương trìnhThời gian kéo dàiDùng nhiều mồi khác nhauGiảm số chu kỳƯu khuyết điểm của PCR:Ưu điểm:Hiệu quả cao: hoạt động trên một lượng DNA cực nhỏ Tính đặc hiệu cao Nhiều mồi hoạt động trên phạm vi đối tượng rộng (thực vật, động vật, nấm mốc)Đơn giản hóa quá trình giải trình tự DNAKhuyết điểm:Khó khăn và tốn kém khi tạo mồi PCRGặp trục trặc khi phản ứng thất bại   ↓ ↓ Gửi ý kiến ↓ CHÚ Ý: Bài giảng này được nén lại dưới dạng RAR và có thể chứa nhiều file. Hệ thống chỉ hiển thị 1 file trong số đó, đề nghị các thầy cô KIỂM TRA KỸ TRƯỚC KHI NHẬN XÉT ↓

Hãy thử nhiều lựa chọn khác

KHTN6

KHTN6. Bài 5.Đo khối lượng (t1)

Sinh học 8 sách vnen

khtn6- bài 13 tiêt 3-CD

SINH 6-CÁNH DIỀU-TIẾT 10+11 - TỪ TẾ BÀO ĐẾN CƠ THỂ

KHTN6 cánh diều bài 12 tế bào- ... sống (tiết 1)

Còn nữa... ©2008-2017 Thư viện trực tuyến ViOLET Đơn vị chủ quản: Công ty Cổ phần Mạng giáo dục Bạch Kim - ĐT: 04.66745632 Giấy phép mạng xã hội số 16/GXN-TTĐT cấp ngày 13 tháng 2 năm 2012