Các Phường Pháp Sắc Ký Cột - Tài Liệu Text - 123doc

Tải bản đầy đủ (.ppt) (30 trang)

1. Trang chủ
>>
2. Kỹ Thuật - Công Nghệ
>>
3. Hóa học - Dầu khí

Các phường pháp sắc ký cột

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (2.78 MB, 30 trang )

SẮC KÝ CỘT I. NGUYÊN TẮCII. KỸ THUẬT TRIỂN KHAIIII. RỬA CỘTIV. MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ CỘTNGUYÊN TẮCSắc ký là một phương pháp vật lý để tách riêng các thành phần trong một hỗn hợp bằng cách phân chia chúng thành 2 pha: pha động và pha tĩnh.Sắc ký hấp phụ được thực hiện trên một ống thủy tinh thẳng đứng gọi là “cột” với chất hấp phụ đóng vai trò pha tĩnh, dung môi rửa cột đóng vai trò pha động chảy qua chất hấp phụ.Đối với các chất riêng biệt trong hỗn hợp, tùy theo khả năng hấp phụ và khả năng hòa tan của nó đối với dung môi rửa cột để được lấy ra lần lượt trước hoặc sau.Chất hấp phụ trong sắc ký cột thừơng dùng là oxid nhôm, silicagel, CaCO3 , than hoạt tính, polyamid, …Các chất này phải được tiêu chuẩn hóa.Dung môi dùng có thể là 1 hoặc hỗn hợp 2, 3 loại dung môi có tỉ lệ thích hợp. Với các chất hấp phụ cổ điển, dung môi sử dụng có độ phân cực tăng dần.Cột là những ống làm bằng thủy tinh, đầu dưới có khóa, đầu trên có nút mài để nối với một phễu chứa dung môi, loại này thường được bán sẵn trên thị trường với nhiều loại kích cỡ lớn nhỏ. Việc lựa chọn kích thước cột rất quan trọng. Thông thường cột có đường kính nhỏ và chiều dài càng dài thì sự tách càng tốt.NGUYÊN TẮCKỸ THUẬT TRIỂN KHAIa. Chuẩn bị cộtRửa cột thật sạch, tráng với nước cất và sấy khô.Cho bông gòn vào đáy cột (có thể cho thêm một lớp cát mịn sạch).Kẹp cột thẳng đứng trên giá.Cho chất hấp phụ vào cột thường được gọi là nhồi cột.Có 2 cách nhồi cột: nhồi cột ướt và nhồi cột khô.- Nhồi cột ướt: Dùng các chất hấp phụ có khả năng trương phình như Silicagel, Sephadex …- Nhồi cột khô: Dùng các chất hấp phụ không có khả năng trương nở như Al2O3, CaCO3. b. Đưa chất phân tích vào cộtKhi đưa chất phân tích vào cột là phải phân tán thành một lớp mỏng đồng đều trên mặt thoáng phẳng. Có nhiều phương pháp để đưa chất phân tích vào cột:- Phương pháp dùng đĩa giấy- Cho thẳng dung dịch thử lên cột- Trộn chất thử với một lượng chất hấp phụ: Trộn dung dịch cần phân tích với một lượng nhỏ chất hấp phụ, trộn đều, sấy khô dung môi rồi cho vào cột bằng cách trải thành một lớp đều trên mặt cột.Trong 3 cách trên, cách cho thẳng dung dịch vào cột là gọn và nhanh hơn cả, nhưng phải đảm bảo các yếu tố sau:• Chất thử hoà tan hoàn toàn.• Dung dịch chất thử phải nạp vào cột đều.• Khi toàn bộ chất thử đã ngấm hết vào cột mới cho tiếp dung môi mới.• Cho dung môi nhẹ nhàng, không làm xáo trộn mặt cột. Nếu chất thử ngấm vào cột tạo thành những lớp có bề dày đều nhau là chứng tỏ kỹ thuật đảm bảo.