LY TRÍCH DNA BẰNG Bí Quyết CỘT SILICA

bây giờ cách ly trích DNA bằng phương pháp tiêu dùng cột silica đang tỏ ra siêu điểm cộng mau chóng và đơn thuần hơn so với cách tách chiết tay chân. toàn bộ các bí quyết ly trích DNA đều nhắm đến mục đích là giải phóng và tinh sạch DNA, trong các biện pháp thì cột silica đem lại sản phẩm sau ly trích đạt được độ tinh sạch cao.

quá trình ly trích DNA bằng cột silica. quá trình ly trích phá màng. mục đích của giai đoạn này là phá bỏ màng tế bào và màng nhân của tế bào vi sinh vật, giải phóng DNA/ RNA ra không tính dung dịch tạo tiền để cho việc thu nhận và tinh sạch DNA. Việc ly trích sẽ dùng các loại hóa chất Có thể biến tính phá vỡ màng tế bào phê chuẩn việc phá vỡ các cấu trúc đạm. các hóa chất ly trích có thành phần và nồng độ đệm ly giải biến đổi tùy theo mục tiêu tách chiết là ADN hoặc ARN, nhưng về cơ bản đều chứa những muối chaotropic (guanidine HCL, guanidine thiocyanate, urea và lithium perchlorate) ở nồng độ cao, làm mất tính vững bền của link hydro, lực Van der Waals và các thúc đẩy kỵ nước. Do đặc tính này, các chất chaotropic có một số tác dụng sau:

Ly giải màng tế bào,

Biến tính protein, ADN và những đại phân tử khác,

Bất hoạt nuclease,

ảnh hưởng công đoạn gắn acid nucleic vào silic.

ngoài ra, 1 số chất gột rửa (detergent) và enzyme (thường sử dụng là proteinkinase hoặc lysozyme) cũng được sử dụng nhằm tăng công hiệu hòa tan đạm và quá trình ly giải.

Trong quy trình ly trích DNA plasmid, những chất chaotropic không được thêm vào dung dịch ly giải với mục tiêu tách plasmid khỏi ADN hệ gen trước, giảm thiểu nếu cả plasmide và ADN hệ gen đều được giải phóng cùng 1 lúc vì rất khó để phân tách ADN mạch vòng nhỏ với ADN hệ gen có trọng lượng phân tử cao.

công đoạn gắn cột. Sau lúc biến tính phá vỡ cấu trúc tế bào, DNA/ RNA được giải phóng ra bên cạnh dung dịch, tiếp nối dung dịch này sẽ được vận chuyển qua cột silica để các DNA/ RNA Có khả năng link với những hạt silica và được giữ lại, các thành phần khác sẽ đi qua và chuyển sang đáy tube từ đó tách được DNA/ RNA ra khỏi dung dịch. Ở bước này các hóa chất theo bộ test sẽ có nhiệm vụ là tăng cường ái lực giữa hạt silica và DNA/ RNA hỗ trợ quá trình gắn kết, đồng thời có tách dụng rửa

DNA/ RNA giúp loại bỏ những thành phần xác tế bào và hóa chất ly trích ở bước trước ấy. Cồn thường được tiêu dùng để tăng khả năng gắn của acid nucleic vào silica, thường tiêu dùng là ethanol hoặc đôi lúc là isopropanol. Nồng độ cồn sẽ được tối ưu hóa để bảo đảm các DNA/ RNA không bị liên quan, quá phổ biến ethanol sẽ làm đứt gãy ADN, trái lại quá ít ethanol sẽ ko thể tương trợ cho công đoạn rửa.

Rửa. Đây là bước loại bỏ những thành phần còn sót lại từ quá trình ly trích như đạm, polysaccharide, những loại vật chất nội bào nhằm đạt hiệu năng tách chiết và tinh sạch ADN/ ARN cao.

Về cơ bản có 2 bí quyết rửa mẫu.

(1) nếu mẫu chứa đa dạng đạm và mẫu ly trích có màu (VD : gan, phân, lá cây…) bắt buộc tăng cường ly trích nhẹ với hóa chất ở nồng độ phải chăng.

(2) Mẫu ko chứa rộng rãi protein như quá trình tách chiết ADN plasmid hoặc tinh sạch sản phẩm PCR, thì Có thể chỉ bắt buộc dùng ethanol để thực hành quá trình rửa.

Sau lúc rửa

thực hành ly tâm làm khô cột nhằm loại ethanol. ví như cột lọc vẫn còn sót lại ethanol, chất này sẽ đi vào trong phản ứng PCR/ Real time PCR sau đó làm tương tác tới hiệu năng phản ứng.

Ethanol còn sót lại trong mẫu tách chiết ko thể được nhận diện được ưng chuẩn Kết cục UV 280/260. do vậy để đánh giá ethanol còn sót lại là dịch DNA sau ly trích sẽ ko đông đá hoàn toàn lúc bảo quản ở – 20oC.

Xem chi tiết: https://visitech.vn/ly-trich-dna-bang-phuong-phap-cot-silica/

https://visitech.vn/ly-trich-dna-bang-phuong-phap-cot-silica/