Nguyên Tắc Multiplex PCR - Tài Liệu Text - 123doc

1. Trang chủ >
2. Khoa Học Tự Nhiên >
3. Sinh học >

Nguyên tắc multiplex PCR

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.16 MB, 70 trang )

16 Khơng đòi hỏi mẫu phải tinh sạch cao vết máu khô, mẫu vật khảo cổ.Nhược điểm của phản ứng PCR Đòi hỏi phải biết trình tự nucleotid của đoạn DNA cần khuếch đại,hay ít nhất cũng phải biết trình tự hai đầu của phân tử DNA. Chỉ khuếch đại những phân tử DNA có kích thƣớc nhỏ hơn 3 kb, tốtnhất là 1 kb. Rất dễ bị nhiễm, dẫn đến tạo sản phẩm phụ dƣơng tính giả.Ứng dụng của kỹ thuật PCRDo có khả năng khuếch đại một lƣợng DNA cực nhanh và chuyên biệt nên kỹ thuật PCR đƣợc áp dụng rộng rãi trên nhiều lĩnh vực Nguyễn Văn Uyển, 1995:- Sản xuất các mẫu dò. - Ứng dụng trong khuếch đại DNA, RNA.- Ứng dụng để phân tích đa dạng di truyền. - Ứng dụng trong chẩn đoán bệnh.

2.4.6 Nguyên tắc multiplex PCR

Multiplex PCR là phản ứng PCR cho phép phát hiện cùng lúc nhiều gen của một sinh vật hay nhiều sinh vật khác nhau bằng cách sử dụng nhiều cặp mồi khácnhau trong một phản ứng.2.5 Các công trình nghiên cứu về phát hiện lồi trong thịt chế biến bằng phƣơng pháp multiplex PCRHơn một thập kỉ qua, sau khi ra đời phƣơng pháp PCR nói chung và multiplex PCR nói riêng đã đƣợc sử dụng rộng rãi để phát hiện hay phân biệt DNAcác sinh vật khác nhau từ nhiều nguồn mẫu. Vì vậy phƣơng pháp multiplex PCR cũng đã đƣợc nhiều nhà nghiên cứu sử dụng trong việc phân biệt loài động vật trongthịt chế biến. Năm 1997, Wayne và ctv đã có cơng trình nghiên cứu về trình tự mtDNAdài2001 bp của 23 dòng chó. Kết quả nghiên cứu cho thấy trên mtDNA có trình tự bảo tồn cho cả 23 dòng chó.17 Tại Hoa Kỳ, Sawyer 1997 đã tìm ra một phƣơng pháp nhanh và nhạy đểxác định và ngăn chặn tình trạng nhập khẩu bò nhiễm BSE. Tác giả đã xây dựng quy trình PCR phát hiện thịt bò trong thịt và bột thịt xƣơng dựa trên đoạn gen bảotồn của mtDNA bò B – mtDNA. Năm 1998, Matsugana đã cơng bố cơng trình nghiên cứu phát hiện 6 loại thịtbò, heo, gà, cừu, dê, ngựa từ thịt chế biến. Tác giả sử dụng 7 đoạn mồi với tỉ lệ thích hợp để phát hiện DNA chuyên biệt cho từng loài. Mồi xi đƣợc thiết kế dựatrên trình tự DNA bảo tồn của gen mtDNA, còn mồi ngƣợc đƣợc thết kế dựa vào trình tự chuyên biệt ở mỗi loài. Các cặp mồi này cho các sản phẩm PCR có kíchthƣớc khác nhau tƣơng ứng với 6 loại thịt. Các đoạn DNA của dê, gà, bò, cừu, heo, ngựa lần lƣợt có khích thƣớc: 157, 227, 274, 331, 398, 439 bp. Kết quả PCR đƣợcquan sát bằng điện di. DNA của dê, gà, bò, cừu, heo đƣợc phát hiện cả đối với DNA tách chiết từ thịt xử lý nhiệt ở 100C hay 120 C, riêng đối với thịt ngựa thì khơngphát hiện đƣợc ở 120 C. Giới hạn nhỏ nhất của nồng độ DNA mà phản ứng PCRcòn phát hiện đƣợc là 0,25 ng. Năm 2000, Montiel-Sosa và ctv đã thiết kế cặp mồi có tính chuyên biệt caotrên đoạn bảo tồn của gen mtDNA. Cặp mồi này đƣợc dùng để khuếch đại đoạn DNA dài 531bp của gia cầm bằng phƣơng pháp PCR. Phƣơng pháp này tỏ ra hữudụng đối với cả thịt tƣơi và hỗn hợp thịt chế biến bao gồm thịt phơi khơ và thịt nấu chín từ bò, cừu, gà.Năm 2004, Myers và ctv cũng đã dựa vào đoạn mtDNA để thiết lập phản ứng multiplex PCR nhằm phát hiện thịt các lồi bò, heo, cừu, dê, ngựa trong thức ănchó. Giới hạn DNA để phát hiện là 1 gkg. Kết quả cho thấy chỉ có 27 mẫu trong tổng số 31 mẫu là chứa thịt bò và heo các mẫu thức ăn chó đƣợc ghi trên nhãn làchỉ gồm thịt bò và heo.18Chƣơng 3 NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Nội dung thực hiện

Xem Thêm

Tài liệu liên quan

• Sử dụng chỉ thị phân tử Microsatellite đánh giá đa dạng di truyền các dòng keo lá tràm (Acacia auriculiformis)
  • 70
  • 883
  • 6

Tải bản đầy đủ (.pdf) (70 trang)

Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về

(1.16 MB) - Sử dụng chỉ thị phân tử Microsatellite đánh giá đa dạng di truyền các dòng keo lá tràm (Acacia auriculiformis)-70 (trang) Tải bản đầy đủ ngay ×