Phương Pháp đếm Hồng Cầu Và Bạch Cầu Bằng Buồng ... - 123doc

Có thể bạn quan tâm

Tải bản đầy đủ (.pdf) (17 trang)

Trang chủ

Luận Văn - Báo Cáo

Y khoa - Dược

PHƯƠNG PHÁP ĐẾM HỒNG CẦU VÀ BẠCH CẦU BẰNG BUỒNG ĐẾM NEUBAUER THÔNG QUA KÍNH HIỂN VI

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (848.19 KB, 17 trang )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHTRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TP.HCMKHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG-----------------------------------------------BÁO CÁOPHƯƠNG PHÁP ĐẾM HỒNG CẦUVÀ BẠCH CẦU BẰNG BUỒNG ĐẾMNEUBAUER THÔNG QUA KÍNH HIỂN VINHÓMGVHDKhóa: Nhóm 2 (Đề tài 5B): Lê Cao Đăng: 2018-2019Mục lụcLời cảm ơn .................................................................................................................................................... 3I. MỤC TIÊU THÍ NGHIỆM .................................................................................................................... 1II. DỤNG CỤ ............................................................................................................................................... 1III. CÁC PHẦN THỰC HIỆN CHÍNH..................................................................................................... 4IV. NỘI DUNG THỰC HIỆN .................................................................................................................... 4V. SAI SỐ ..................................................................................................................................................... 8VI. VỆ SINH VÀ THU DỌN...................................................................................................................... 8VII. BÁO CÁO KẾT QUẢ ......................................................................................................................... 9VIII. TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................................................... 14Lời cảm ơnNhóm em xin được gửi lời cám ơn chân thành đến thầy Lê Cao Đăng đã hướngdẫn và tạo điều kiện thuận lợi nhất để chúng em học hỏi tìm tòi trong suốt quá trìnhthí nghiệm, được tiếp xúc với những kiến thức, lĩnh vực mới bổ ích đáp ứng nhu cầulao động và kĩ năng sau khi ra trường. Bên cạnh đó, có khả năng nghiên cứu và làmviệc theo nhóm, có khả năng tự nghiên cứu, học tập, tiếp thu kiến thức lâu dài thíchnghi nhanh chóng với môi trường làm việc hiện đại.I. MỤC TIÊU THÍ NGHIỆM-Nắm vững nguyên tắc hoạt động, cấu tạo của kính hiển vi quang học. Sử dụng kính hiểnvi quang để quan sát và thu nhận hình ảnh mô thực vật.-Hiểu và nắm vững phương pháp đếm hồng cầu và bạch cầu bằng buồng đếm Neubauer.Sử dụng buồng đếm Neubauer đếm số lượng hồng cầu và bạch cầu trong một đơn vị thểtích máu.II. DỤNG CỤ1. Kính hiển viCác kính hiển vi gồm một nguồn sáng và bộ thấu kính. Các kính hiển vi có độ khuếch đạikhác nhau cũng như các chế độ quan sát khác nhau. Nguồn ánh sáng là loại ánh sáng nhìnthấy dùng để phát sáng vật cần quan sát. Kính hiển vi đầy đủ gồm 1 vật kính có tiêu cự rấtngắn được đặt gần lam kính và 2 thị kính có chức năng thay đổi tia sáng sao cho hình ảnhkhuếch đại nằm đúng vào võng mạc. Hình 1 và 2 lần lượt mô tả cấu tạo và hoạt động củakính hiển vi.11-Đế kính hiển vi4-Thị kính7-Tụ quang10-Chỉnh vị trí thị kính13-Công tắc điện2-Vật kính5-Ổ quay vật kính8-Nút chỉnh bàn trượttheo chiều ngang11-Kẹp giữ lam kính14-Chỉnh độ sang3-Bàn trượt6-Mâm kính9-Nút chỉnh bàn trượt theochiều dọc12-Nút chỉnh thô15-Nút chỉnh tinh2.Máy chụp ảnh hoặc điện thoại di động.3.Bộ đếm hồng cầu và bạch cầu: buồng đếm Neubauer, RBC pipette, WBCpipette, 2 lamen số.▪ Buồng đếm Neubauer:Ngày nay, mặc dù các kỹ thuật và thiết bị cho phòng thí nghiệm rất phát triển, phương phápsử dụng buồng đếm vẫn rất phổ biến cho việc đếm số lượng tế bào trên thế giới.Có nhiều loại buồng đếm: Neubauer, Smic, Thoma…. Trong bài thí nghiệm này, buồngđếm Neubauer được lựa chọn sử dụng.Buồng đếm Neubauer được cấu tạo từ một tấm kính mỏng, kích thước 30 × 70 𝑚𝑚2 , bềdày 4 mm.Hình 2– Buồng đếm Neubauer thương mạiTrong buồng đếm, khu vực trung tâm có lưới đếm. Các tế bào được đếm ở vị trí này.2Các buồng đếm đôi phổ biến hơn buồng đếm đơn. Loại này gồm 2 vị trí đếm riêng biệtnhau. Loại buồng Neubauer ở phòng thí nghiệm là buồng đếm đôi.Khu vực lưới đếm có kích thước 3 × 3 𝑚𝑚2 . Gồm 9 ô vuông được chia nhỏ, cạnh mỗi ôlà 1 𝑚𝑚.Hình 3- Các vạch đếm của buồng đếm NeubauerTrong trường hợp đếm tế bào máu, bạch cầu (WBCs) được đếm ở 4 ô lớn (ô số 1) ở 4 góc.Các tiểu cầu và hồng cầu được đếm ở ô vuông trung tâm. Ô này được chia làm 25 ô nhỏvới bề rộng 0,2 mm; mỗi ô này lại được chia làm 16 ô nhỏ nữa.▪ Lamen:Lamen là tấm kính hình vuông với bế rộng 22 mm. Lamen được đặt lên trên buồng đếm,bao trùm khu vực trung tâm. Lamen quy định khoảng không gian cho các tế bào giữa đáybuồng đếm và lamen. Buồng đếm được thiết kế sao cho khoảng cách giữa đáy buồng đếmvà lamen là 0,1 mm.Việc lamen bị nhấc lên khi dung dịch được bơm vào buồng đếm vẫn có khả năng xảy ra.Để tránh điều này, một số buồng đếm có sử dụng kẹp giữ lamen lại. Nếu lamen bị nhấclên, khoảng cách giữa lamen và đáy buồng đếm sẽ lớn hơn 0,1 mm. Điều này ảnh hưởngđến độ chính xác của phép đo.3▪ Pipette:Pipette được dùng để đưa một lượng chính xác dung dịch vào trong buồng đếm. Trong lịchsử, pipette được chế tạo từ thủy tinh. Ngày nay, pipette thủy tinh được thay thế bởimicropipette, có dung tích cực đại từ 20, 200 đến 2000 𝜇𝑙.4.Dung dịch Macarno, dung dịch Lazarus.5.Bấm đếm.6.Quả bóp cao su.7.Lanset, kim, bao tay.8.Cồn, bông gòn, miếng gạt, khăn lau.III. CÁC PHẦN THỰC HIỆN CHÍNH-Phần 1: Quan sát và chụp ảnh 1 mô thực vật ở chế độ × 4, × 10, × 40.-Phần 2: Đếm hồng cầu.-Phần 3: Đếm bạch cầu.IV. NỘI DUNG THỰC HIỆN❖ Phần 1: Quan sát mô thực vậtDùng kính hiển vi quan sát và chụp lại ảnh 1 mô thực vật ở chế độ các chế độ phóng đạicủa vật kính: × 4, × 10, × 40.❖ Phần 2: Đếm hồng cầu▪ Dụng cụ:-Kính hiển vi.-Máy chụp ảnh hoặc điện thoại di động.-Bộ đếm hồng cầu và bạch cầu: buồng đếm Neubauer, RBC pipette, lamen số 1.-Dung dịch Macarno.-Bấm đếm.-Quả bóp cao su.-Lanset, kim, bao tay.-Cồn, bông gòn, miếng gạt, khăn lau.▪ Chuẩn bị:-Cho các dụng cụ cần dùng ra khai.4-Dùng miếng gạt lau sạch buồng đếm, lamen.-Gắn ống mủ vào RBC pipette.-Gắn quả bóp cao su vào đầu còn lại của ống mủ.-Mở nắp kim và lanset, cố định kim vào lanset, ấn nhẹ kim vào để lò xo lanset ở chế độnén. (Chú ý bước này phải thực hiện cẩn thận). Sau đó đậy nắp lanset lại và chuyển quathang bấm số 4.-Lắp 2 thị kính × 10 vào kính hiển vi, cắm dây nguồn.▪ Tiến hành:+Quan sát và chụp ảnh buồng đếm Neubauer bằng kính hiển vi:Dùng kính hiển vi, quan sát và chụp ảnh buồng đếm Neubauer ở chế độ × 4, × 10, × 40.+Chuẩn bị dung dịch đếm hồng cầu:-Người thực hiện đeo bao tay vào.-Dùng bông gòn thấm cồn vệ sinh đầu ngón tay cái của người được đo, bóp nhẹ cho máudồn lên.-Đặt lanset tiếp xúc đầu ngón cái, bấm nhẹ, dùng tay nặng nhẹ để được giọt máu bằng hạtđậu.-Dùng RBC pipette hút máu lên đến mức 0,5 (chú ý có thể hút dư rồi trả lại).-Tiếp tục với RBC pipette để hút dung dịch Macarno đến mức 101.Chú ý: không để có bọt khí khi hút máu và dung dịch pha.-Tháo ống mủ ra khỏi pipette, dùng ngón cái và ngón trỏ bịt hai đầu pipette, lắc đều theochiều dọc pipette.-Gắn lại ống mủ vào pipette. Chờ 2 phút.-Đặt lamen lên buồng đếm tại vị trí trung tâm buồng đếm.Hình 4-Lamen được đặt ở vị trí trung tâm của buồng đếm-Bỏ 1 giọt dung dịch đầu tiên trong pipette ra khăn.-Đặt đầu pipette sát cạnh trên của lamen, từ từ bơm dung dịch ra buồng đếm, cho đến khidung dịch lan tỏa đều ra 2 phần của buồng đếm. Trong trường hợp xuất hiện bọt khí hoặclamen bị bung ra, thực hiện lại quá trình bơm dung dịch.5Hình 5- Bơm dung dịch vào buồng đếm-Nhẹ nhàng đưa buồng đếm lên kính hiển vi đọc kết quả.+Đếm hồng cầu:Vùng đếm 1:-Đặt kính hiển vi ở chế độ × 4, kiểm tra xem hồng cầu có trải đều trên buồng đếm haykhông. Chụp lại ảnh.-Ở chế độ × 10, chuyển đến ô vuông ở trung tâm (bên trong có 25 ô vuông, mỗi ô vuôngcó 16 ô vuông nhỏ). Điều chỉnh để thấy rõ nét, chụp hình lại.-Dùng bấm đếm, đếm số lượng hồng cầu ở 5 ô vuông, 4 ô ở 4 góc và 1 ô ở giữa, mỗi ô có16 ô nhỏ.-Chú ý: đối với những tế bào nằm ở đường biên ô vuông, chỉ đếm những tế bào ở cạnh trênvà cạnh trái của ô, và chỉ những HC nằm vào phía trong ít nhất 1/2. Đếm theo hình zigzag.Hình 6-Đếm số tế bào theo hình zigzag-Ghi lại số lượng tế bào ở ô vuông thứ nhất. Lập lại thao tác cho những ô kế tiếp.-Tính số lượng hồng cầu trong một đơn vị thể tích theo công thức:𝑅𝐵𝐶𝑠4000(=× 200) × 𝑡ổ𝑛𝑔 𝑠ố 𝑡ế 𝑏à𝑜 𝑡𝑟𝑜𝑛𝑔 5 ô𝑚𝑚3806Với804000: thể tích các ô đếm.200: tỷ lệ dung dịch pha.Vùng đếm 2: tiến hành tương tự các bước ở vùng đếm 1. Tính số lượng hồng cầu trongmột đơn vị thể tích ở vùng đếm 2.❖ Phần 3: Đếm bạch cầu▪ Dụng cụ:-Kính hiển vi.-Máy chụp ảnh hoặc điện thoại di động.-Bộ đếm hồng cầu và bạch cầu: buồng đếm Neubauer, WBC pipette, lamen số 2.-Dung dịch Lazarus.-Bấm đếm.-Quả bóp cao su.-Lanset, kim, bao tay.-Cồn, bông gòn, miếng gạt, khăn lau.▪ Chuẩn bị:-Dùng miếng gạt và cồn lau sạch buồng đếm.-Gắn ống mủ vào WBC pipette.-Gắn quả bóp cao su vào đầu còn lại của ống mủ.-Mở nắp kim và lanset, cố định kim vào lanset, ấn nhẹ kim vào để lò xo lanset ở chế độnén. (Chú ý bước này phải thực hiện cẩn thận). Sau đó đậy nắp lanset lại và chuyển quathang bấm số 4.▪ Tiến hành:+Chuẩn bị dung dịch đếm bạch cầu:-Người thực hiện đeo bao tay vào.-Dùng bông gòn thấm cồn vệ sinh đầu ngón tay cái của người được đo, bóp nhẹ cho máudồn lên.-Đặt lanset tiếp xúc đầu ngón cái, bấm nhẹ, dùng tay nặng nhẹ để được giọt máu bằng hạtđậu.-Dùng WBC pipette hút máu lên đến mức 0,5 (chú ý có thể hút dư rồi trả lại).-Tiếp tục với WBC pipette để hút dung dịch Lazarus đến mức 11.Chú ý: không để có bọt khí khi hút máu và dung dịch pha.-Tháo ống mủ ra khỏi pipette, dùng ngón cái và ngón trỏ bịt hai đầu pipette, lắc đều theochiều dọc pipette.-Gắn lại ống mủ vào pipette. Chờ 2 phút.7-Đặt lamen lên buồng đếm sao cho cạnh lamen trùng cạnh dưới của buồng đếm. Đặt dụngcụ lên mặt bàn nằm ngang.-Bỏ 1 giọt dung dịch đầu tiên trong pipette ra khăn.-Đặt đầu pipette sát cạnh trên của lamen, từ từ bơm dung dịch ra buồng đếm, cho đến khidung dịch lan tỏa đều ra 2 phần của buồng đếm. Trong trường hợp xuất hiện bọt khí hoặclamen bị bung ra, thực hiện lại quá trình bơm dung dịch.-Nhẹ nhàng đưa buồng đếm lên kính hiển vi đọc kết quả.+Đếm bạch cầu:Vùng đếm 1:-Đặt kính hiển vi ở chế độ × 4, kiểm tra xem bạch cầu có trải đều trên buồng đếm haykhông. Chụp lại ảnh.-Ở chế độ × 10, điều chỉnh để thấy rõ nét, chụp lại ảnh.-Bạch cầu được đếm ở 4 ô vuông lớn (ô số 1-hình 3), mỗi ô có 16 ô nhỏ.Chú ý: đối với những tế bào nằm ở đường biên ô vuông, chỉ đếm những tế bào ở cạnh trênvà cạnh trái của ô, và chỉ những HC nằm vào phía trong ít nhất 1/2. Đếm theo hình zigzag.-Ghi lại số lượng tế bào ở ô vuông thứ nhất. Lập lại thao tác cho những ô kế tiếp.-Tính số lượng bạch cầu trong một đơn vị thể tích theo công thức:𝑊𝐵𝐶𝑠10= ( × 20) × 𝑡ổ𝑛𝑔 𝑠ố 𝑡ế 𝑏à𝑜 𝑡𝑟𝑜𝑛𝑔 𝟒 ô3𝑚𝑚44Với : thể tích các ô đếm.1020: tỷ lệ dung dịch pha.Vùng đếm 2: tiến hành tương tự các bước ở vùng đếm 1. Tính số lượng hồng cầu trongmột đơn vị thể tích ở vùng đếm 2.V. SAI SỐSai số trong khoảng 20-30% là chấp nhận được trong phương pháp này bởi các nguồn: saisố pipette, sai số thể tích buồng đếm, sai số tỷ lệ pha mẫu.VI. VỆ SINH VÀ THU DỌN- Sau khi tiến hành các phép đo nhẹ nhàng lấy kim ra khỏi lanset, đóng nắp ống kim vàlanset.-Cho ống kim, bông gòn vào bao tay, cột chặt lại.-Lau sạch buồng đếm, 2 lamen bằng cồn và khăn lau.-Dùng nước rửa sạch 2 pipette bên trong và bên ngoài; rửa sạch ống mủ.-Buồng đếm, lamen, pipette, ống mủ để thật ráo rồi đưa vào hộp đựng.8-Cho tất cả các dụng cụ vào hộp thủy tinh. Lanset đưa vào tủ.-Dùng khăn và cồn lau sạch mặt bàn.VII. BÁO CÁO KẾT QUẢPhần 1: Quan sát mô thực vậtPhần 2: Đếm hồng cầuHình 7 : Tiến trình lấy mẫu hồng cầu và quan sátHình 8 : Buồng đếm Neubauer ở chế độ x4, x10, x409Hình 9 : Buồng đếm có tế bào hồng cầu ở chế độ x4Hình 10 : Buồng đếm có tế bào hồng cầu ở chế độ x10Số lượng hồng cầu trong một đơn vị thể tích:Vùng đếm 1Vùng đếm 2Giá trị trung bình10RBCs/mm34.32 x 1062.26 x 1063.29 x 106RBCs/ml4.32 x 1032.26 x 1033.29 x 103Phần 3: Đếm bạch cầuHình 11 : Buồng đếm có tế bào bạch cầu ở chế độ x4Hình 12 : Buồng đếm có tế bào hồng cầu ở chế độ x111Số lượng bạch cầu trong một đơn vị thể tích:Vùng đếm 1Vùng đếm 2Giá trị trung bìnhWBCs/mm36.6 x 1037.2 x 1036.9 x 103WBCs/ml6.67.26.9Câu hỏi:1. Nhận xét kết quả về số lượng hồng cầu và bạch cầu trongmột đơn vị thể tích máu. Kết quả như vậy có phù hợp chongười có sức khỏe bình thường không?Mẫu máu đã lấy là nam 20 tuổi, lượng hồng cầu đếm được là 3.29x106 RBCs/mm3, lượngbạch cầu đếm được là 6900 WBCs/.Số liệu trên bị ảnh hưởng rất lớn bởi sai số trong quá trình đo và thực hiện thí nghiệm làđáng kể bởi các nguồn: sai số pipette, sai số thể tích buồng đếm, sai số tỷ lệ pha mẫu,v…v…Mặc khác, lượng hồng cầu và bạch cầu trung bình ở mỗi đối tượng là khác nhau bởi nhiềulí do như : vị trí địa lý (đồng bằng hay vùng cao), giới tính (nam hay nữ),…Vì vậy, để đảm bảo được số liệu trên là chấp nhận được, ta cần 1 lượng dữ liệu lớn phânloại bệnh nhân ở từng khu vực, từng giới tính. Từ đó mới đưa ra chẩn đoán chính xác đểđiều trị.2. Giải thích các công thức tính tỷ lệ hồng cầu và bạch cầutrên một thể tích máu.- Công thức số lượng hồng cầu trong một đơn vị thể tích theo công thức:𝑅𝐵𝐶𝑠4000(=× 200) × 𝑡ổ𝑛𝑔 𝑠ố 𝑡ế 𝑏à𝑜 𝑡𝑟𝑜𝑛𝑔 5 ô𝑚𝑚38080Với 0.052 𝑥 0.1 𝑥 5 𝑥 16 =là thể tích các ô đếm4000200 tỷ lệ dung dịch pha- Công thức số lượng bạch cầu trong một đơn vị thể tích theo công thức:𝑊𝐵𝐶𝑠10(=× 20) × 𝑡ổ𝑛𝑔 𝑠ố 𝑡ế 𝑏à𝑜 𝑡𝑟𝑜𝑛𝑔 𝟒 ô𝑚𝑚344Với 1 𝑥 0.1 𝑥 4 = là thể tích các ô đếm1020 là tỷ lệ dung dịch pha123. Tại sao vị trí đếm của bạch cầu là ở 4 ô vuông lớn ở 4 góc,trong khi đó các tế bào hồng cầu được đếm ở 5 ô vuông bêntrong ô vuông trung tâm?Đếm hồng cầu ở vị trí ô trung tâm vì hồng cầu có số lượng lớn nên phải đếm ở những ônhỏ ở vị trí trung tâm để thu gọn số lượng cần đếm.Còn bạch cầu thì có tỉ lệ nhỏ hơn rất nhiều so với hồng cầu nên ta đếm ở vị trí 4 góc lớnngoài để hạn chế sai số.4. Giải thích nguyên tắc phóng đại của kính hiển vi.Hình 13 : Sơ đồ tạo ảnh kính hiển vi𝐴𝐵 → 𝐴1 𝐵1 → 𝐴2 𝐵25. Pha tương phản có ảnh hưởng đến chất lượng hình ảnhquan sát không ?Các đối tượng tương phản (mẫu không màu, trong suốt, không nhuộm) không hấp thu ánhsáng nên không thể quan sát chi tiết.Kính hiển vi tương phản pha lợi dụng cả ánh sáng trực tiếp và ánh sáng nhiexu xạ để tăngchất lượng và độ rõ của các mẫu trong suốt.+ Phản pha dương : hình ảnh mẫu có màu xám tối trên một nền màu sáng.+ Phản pha âm : hình ảnh mẫu có màu sáng hơn so với nền màu đen.13VIII. TÀI LIỆU THAM KHẢO1. Cell count with Neubauer champer, Technical note, Oscar Bastidas.2. />%C4%91%E1%BA%BFm+h%E1%BB%93ng+c%E1%BA%A7u#pid13023. />14

Tài liệu liên quan

PHƯƠNG PHÁP PHỔ HỒNG NGOẠI VÀ ỨNG DỤNG TRONG THỤC PHẨM
- 53
- 2
- 26
Nghiên cứu kiến thức - thực hành phương pháp da kề da và nuôi con bằng sữa mẹ sớm của các bà mẹ tại 4 bệnh viện Hà Nội, năm 2005
- 73
- 5
- 51
nghiên cứu kiến thức - thực hành phương pháp da kề da và nuôi con bằng sữa mẹ sớm của các bà mẹ tại 4 bệnh viện hà nội, năm 2005
- 73
- 2
- 8
Báo cáo " Nghiên cứu cấu trúc của hai thiosemicacbazon và phức chất Ni(II) của chúng bằng phương pháp phổ khối lượng và cộng hưởng từ hạt nhân " pptx
- 5
- 563
- 2
Nghiên cứu áp dụng các phương pháp địa chất lỗ khoan xác lập quy trình tính các thông số đàn hồi phục vụ kết cấu nền móng và kháng chấn trong xây dựng công trình tại vùng tp hồ chí minh và các tỉnh lân cận
- 128
- 1
- 3
skkn phương pháp dựng thiết diện và các dạng toán trung học phổ thông
- 46
- 1
- 2
skkn đổi mới phương pháp dạy học hướng dẫn học sinh tự học, tự đọc thông qua bài giảng trên lớp
- 117
- 2
- 6
Báo cáo nghiên cứu khoa học: "PHƯƠNG PHÁP TỰ HỌC - CẦU NỐI GIỮA HỌC TẬP VÀ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC" potx
- 4
- 1
- 9
Xây dựng và sử dụng hệ thống câu hỏi trắc nghiệm khách quan để đánh giá thành quả dạy và học môn toán ở trường phổ thông qua chương phương pháp tọa độ trong mặt phẳng
- 143
- 835
- 0
Xây dựng và sử dụng bộ câu hỏi, bài tập phân hóa trong dạy học chủ đề phương pháp tọa độ trong không gian ở trường trung học phổ thông
- 107
- 689
- 3