Phương Pháp điện Di DNA - TaiLieu.VN

Mạng xã hội chia sẻ tài liệu Upload Đăng nhập Nâng cấp VIP Trang chủ » Khoa Học Tự Nhiên » Sinh học6 trang 1404 lượt xem 840Phương pháp điện di DNA

Điện di là kỹ thuật được sử dụng trong thí nghiệm để phân để phân tích các đại phân tử tích điện. Trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử người ta thường sử dụng phương pháp điện di để tách ly, phát hiện phân tử DNA nguyên vẹn, DNA bị cắt hạn chế và DNA của sản phẩm PCR. Axit nucleic nói chung là một phân tử tích điện âm, vì vậy, chúng có thể dịch chuyển qua bảng gel từ cực âm (cathode) sang cực dương (anode) dưới tác dụng của điện trường. ...

Chủ đề:

butmaulam

Sinh học phân tử

Tài liệu Sinh học phân tử

SaveLikeShareReport Download AI tóm tắt /6 Phương pháp điện di DNA Nguyên tắc điện diĐiện di là kỹ thuật được sử dụng trong thí nghiệm để phân để phân tích các đại phân tử tích điện. Trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử người ta thường sử dụng phương pháp điện di để tách ly, phát hiện phân tử DNA nguyên vẹn, DNA bị cắt hạn chế và DNA của sản phẩm PCR.Axit nucleic nói chung là một phân tử tích điện âm, vì vậy, chúng có thể dịch chuyển qua bảng gel từ cực âm (cathode) sang cực dương (anode) dưới tác dụng của điện trường. Trên cùng một bản gel, có cùng một dòng điện những phân tử DNA khác nhau về trọng lượng nên khác nhau về điện tích và chạy được những quãng đường khác nhau sau một thời gian như nhau. Sau khi phân tách bằng điện di, để phát hiện phân tử DNA, người ta dùng phương pháp làm hiện hình. Đối với gel agarose, người ta nhuộm bằng ethidium bromid. Chất này sẽ gắn xen các bazơ của phân tử DNA và phát quang dưới tia tử ngoại. Như vậy dễ dàng cho phép phát hiện vị trí các đoạn DNA trên gel và có thể phân biệt được phân tử DNA trên cùng một bảng gel. Đối với gel polyacrylamid, các phân tử thường được đánh dấu bằng đồng vị phóng xạ và vị trí của chúng sẽ được phát hiện bằng kỹ thuật phóng xạ tự ghi. Trong điện di, người ta sử dụng thang DNA chuẩn, thường là DNA λ. Khi điện di cho chạy cùng với mẫu nghiên cứu, qua đó có thể so sánh với DNA mẫu với DNA chuẩn để biết trọng lưọng phân tử, hoặc trích li được DNA khác nhau.Cách tiến hành Hệ thống điện di bao gồm nguồn điện, buồng điện di, khuôn đổ gel và hệ thống soi chụp ảnh. Các bước được tiến hành như sau:- Cân khoảng 1g agarose cho vào 100ml đệm TBE (Tris-borate-EDTA) hoặc TAE (Tris-acetate-EDTA) ở nhiệt độ phòng, khuấy đều và để yên 1 phút, cho vào lò viba (làm nóng chảy gel và không tạo bọt).- Làm nguội gel xuống 50÷55°C, thêm 1µl ethidium bromid, đổ gel vào khuôn gel và lắp lược.- Khi gel nguội, đặt khuôn gel vào buồng điện di, tháo lược và đổ đệm chạy vào khay gel sao cho đệm cao hơn mặt gel khoảng 2÷5 mm.- Nạp DNA mẫu và DNA chuẩn vào các giếng, đậy nắp và cắm điện cực.- Điện di trong khoảng 30 phút với điện thế 100÷120V.- Chụp hình ảnh gel dưới ánh sáng UV để xem kết quả. Mô hình máy điện diLưu ý: Tùy thuộc vào kích thước của DNA mẫu mà người ta chọn loại gel (agarose, polyacrlamid), nồng độ gel, loại đệm (TBE hoặc TAE). Đệm TAE cho độ phân giải cao các phân đoạn lớn hơn 4 kb, trong khi đệm TBE có phân giải cao từ 0,1 đến 3kb. Ngoài ra, độ phân giải các phân đoạn DNA còn phụ thuộc vào phương pháp điện di, tối ưu điện thế, tối ưu lượng DNA nạp và đệm nạp.Thuốc nhuộm ethidium bromid (EtBr) là một thuốc nhuộm huỳnh quang mà có thể nhận biết cả hai loại DNA sợi đơn và sợi kép. Mặc dù vậy, ái lực liên kết với DNA sợi đơn tương đối thấp hơn so với DNA sợi kép. DNA nhuộm EtBr được nhận biết bằng tia cực tím. Tại bước sóng 254nm, ánh sáng UV được hấp thụ bởi DNA và chuyển sang thuốc nhuộm. Tại bước sóng 302nm và 366nm, ánh sáng UV được hấp thụ bởi chính thuốc nhuộm. Trong cả hai trường hợp, năng lượng được phát xạ ứng với tia tại bước sóng 590nm trong vùng vàng đỏ của quang phổ thấy được. EtBr là chất gây đột biến mạnh, cần phải mang găng tay khi thao tác với dung dịch thuốc nhuộm này và các gel nhuộm. Để tạo độ phân giải cao rõ nét, các vạch và nền nhạt nên nhuộm gel với EtBr ngay sau khi điện di. Ưu, nhược điểm và ứng dụng của phương pháp PCRƯu và nhược điểm của phương pháp PCRƯu điểm: Thời gian thực hiện nhanh, chỉ cần 3 giờ là có thể khuếch đại được một trình tự đáng quan tâm. Thực hiện đơn giản và ít tốn kém (nó được thực hiện trong ống nghiệm plastic nhỏ gồm thành phần tối thiểu được thực hiện đồng thời). Yêu cầu về độ tinh sạch của mẫu không cao (vết máu khô, mẫu vật khảo cổ, những vết tích để lại của người đã chết).Nhược điểm: Cần phải có DNA mồi đặc trưng cho DNA cần khuếch đại. Để có đoạn mồi này ít nhất phải biết trước trình tự nucleotide cần khuếch đại. Kích thước DNA cần khuếch đại không vượt quá 3kb. Khả năng ngoại nhiễm lớn (do thao tác nhiều lần). Sai sót còn do sử dụng E-Taq-polymerase khoảng 104 (sai sót cho một lần sao chép). Phạm vi sử dụng- Sản xuất mẫu dò đánh dấu phóng xạ (dầu dò) với khối lượng lớn, phù hợp với phương pháp lai giữa DNA và DNA, RNA và DNA. - Khuếch đại số lượng RNA, do lượng mRNA nhỏ dưới mức cho phép nên người ta dùng phương pháp RT-PCR để tăng nồng độ mRNA đến một giới hạn phát hiện bằng cách phiên mã ngược: mRNA → cDNA. Từ cDNA, ta đánh giá được mRNA.

Tài liệu liên quan

Nghiên cứu tỷ lệ, thành phần loài nấm nông gây bệnh ở bàn chân bằng kỹ thuật hình thái và sinh học phân tử ở tiểu thương trên địa bàn tỉnh Nghệ An

7 trang

Chlamydia kháng thuốc giải trình tự gene

3 trang

Định lượng protein

2 trang

Điện di protein

2 trang

Khảo sát đặc điểm thực vật, mã vạch ADN và thành phần hoá học của cây rau mương thu hái tại Trà Vinh

7 trang

Khảo sát mã vạch ADN, đặc điểm thực vật học và thành phần hóa học của lá trầu không (Piper betle L.)

8 trang

Đích sinh học phân tử gắn thuốc và triển vọng ứng dụng trong điều trị ung thư vú bộ ba âm tính

7 trang

Nghiên cứu đặc điểm cộng sinh của Trichomonas vaginalis và Mycoplasma hominis bằng phương pháp sinh học phân tử trên phụ nữ độ tuổi sinh sản ở tỉnh Thừa Thiên Huế

4 trang

Đặc điểm thực vật và mã vạch ADN của loài xô thơm Salvia officinalis L., họ Hoa môi (Lamiaceae)

8 trang

Đặc điểm hình thái và thông tin di truyền ITS của cây Distichochlamys rubrostriata W.J.Kress & Rehse, họ gừng (zingiberaceae)

6 trang

Tài liêu mới

Cẩm nang an toàn sinh học phòng xét nghiệm (Ấn bản lần thứ 4)

124 trang

Bài giảng Giải phẫu sinh lí người: Chương 1 - TS. Hồ Đình Quang

29 trang

Bài giảng Giải phẫu sinh lí người: Chương 2 - TS. Hồ Đình Quang

37 trang

Bài giảng Giải phẫu sinh lí người: Chương 3 - TS. Hồ Đình Quang

29 trang

Bài giảng Giải phẫu sinh lí người: Chương 4 - TS. Hồ Đình Quang

20 trang

Bài giảng Giải phẫu sinh lí người: Chương 5 - TS. Hồ Đình Quang

38 trang

Bài giảng Giải phẫu sinh lí người: Chương 6 - TS. Hồ Đình Quang

47 trang

Đánh giá khả năng trích ly polyphenol từ lá vối (Cleistocalyx operculatus) bằng phương pháp siêu âm và xử lý bằng enzyme cellulase

6 trang

Bài giảng Kỹ thuật gen - Chương 5: Biểu hiện gene

36 trang

Bài giảng Kỹ thuật gen - Chương 4: Chọn dòng gene (Tách dòng gene)

11 trang

Bài giảng Kỹ thuật gen - Chương 3: Các loại vector và tế bào vật chủ

52 trang

Bài giảng Kỹ thuật gen - Chương 2: Các kỹ thuật cơ bản

121 trang

Bài giảng Kỹ thuật gen - Chương 1: Lịch sử hình thành kỹ thuật gen

85 trang

Chuyên đề: Sinh thái học cá thể và quần thể sinh vật

W 16 trang

Tài liệu Hướng dẫn giải chi tiết bài tập phân li, phân li độc lập

3 trang

AI tóm tắt

- Giúp bạn nắm bắt nội dung tài liệu nhanh chóng!

Giới thiệu tài liệu

Đối tượng sử dụng

Từ khoá chính

Nội dung tóm tắt

Giới thiệu

Về chúng tôi

Việc làm

Quảng cáo

Liên hệ

Chính sách

Thoả thuận sử dụng

Chính sách bảo mật

Chính sách hoàn tiền

DMCA

Hỗ trợ

Hướng dẫn sử dụng

Đăng ký tài khoản VIP

Zalo/Tel:

093 303 0098

Email:

[email protected]

Phương thức thanh toán

Theo dõi chúng tôi

Facebook

Youtube

TikTok

Chịu trách nhiệm nội dung: Nguyễn Công Hà Doanh nghiệp quản lý: Công ty TNHH Tài Liệu trực tuyến Vi Na - GCN ĐKDN: 0307893603 Địa chỉ: 54A Nơ Trang Long, P. Bình Thạnh, TP.HCM - Điện thoại: 0283 5102 888 - Email: [email protected]ấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015