Phương Pháp Ly Trích Và Kiểm Tra Chất Lượng DNA

Trang chủ » Tính Nồng độ Dna » Phương Pháp Ly Trích Và Kiểm Tra Chất Lượng DNA

Có thể bạn quan tâm

Phương pháp ly trích và kiểm tra chất lượng DNA
    Home
  • TIN CÔNG NGHỆ
  • Phương pháp ly trích và kiểm tra chất lượng DNA
04 Th6

Phương pháp ly trích và kiểm tra chất lượng DNA

ctdtuyet2017-08-16T18:25:14+07:00 By ctdtuyet TIN CÔNG NGHỆ Kiểm tra chất lượng DNA bằng phương pháp quang phổ, Kiểm tra chất lượng DNA bằng phương pháp điện di, phương pháp kiểm tra chất lượng DNA, Phương pháp ly trích DNA 1 Comment PHƯƠNG PHÁP LY TRÍCH VÀ KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG DNA Phương pháp ly trích và kiểm tra chất lượng DNA

Phương pháp ly trích và kiểm tra chất lượng DNA

1. Phương pháp ly trích DNA

Chuẩn bị mẫu:

Dùng dao y tế bâm nhuyễn khoảng 50–100 mg mẫu cho vào tube 2ml chứa sẳn các hóa chất bao gồm 700ml buffer lysis và 18ml proteinase K, ủ hỗn hợp ở 37oC trong 12–24 giờ.

Tiến hành li trích

  • Thêm 300ml phenol:chloroform: isoamy alcolhol (25:24:1) vào tube chứa mẫu sau đó lắc đều và ly tâm 10.000 vòng trong 5 phút ở 25oC
  • Hút dịch lỏng phía trên cho qua tube mới. Sau đó thêm vào tube 700ml chloroform:chloroform (1:1), lắc đều, li tâm 10.000 vòng trong 5 phút ở 25oC.
  • Hút dịch lỏng phía trên cho qua tube mới. Sau đó thêm vào tube 700ml chloroform, lắc đều, li tâm 10.000 vòng 5 phút ở 25oC.
  • Tiếp tục hút phần dịch lỏng phía trên cho qua tube mới. Cho thêm 300ml NaCl 1.2M, 150ml NaOAC2M, 1000ml ethanol 100%,lắc đều, ly tâm 10.000 vòng trong 5 phút ở 25oC.
  • Bỏ phần dịch lỏng bên trên, thu lấy kết tủa, cho thêm 1000ml ethanol 70%  rồi lắc nhẹ, ly tâm 10.000 vòng trong 5 phút ở 25oC.
  • Bỏ phần dịch lỏng, thu lấy kết tủa, để khô DNA ở nhiệt độ phòng, sau đó thêm 200ml TE 1 lần và được trữ ở -20oC.

2. Kiểm tra chất lượng DNA

Có thể kiểm tra chất lượng DNA (định lượng DNA ) bằng phương pháp quang phổ hoặc bằng phương pháp điện di

2.1 Kiểm tra chất lượng DNA bằng phương pháp quang phổ (UV)

Máy đo quang phổ

Máy đo quang phổ

Quang phổ UV có thể sử dụng như 1 kỹ thuật định lượng để đo nồng độ của DNA và mức độ nhiễm của protein. DNA hấp thụ mạnh ở bước sóng 260 nm và kém ở 280 nm trong khi protein thì ngược lại.

DNA được đánh giá là sạch khi có tỷ số 260/280 nằm trong khoảng  1,7-2,0. Việc nhiễm protein sẽ làm tỷ số 260/280 thấp hơn 1,7 ngoài ra sự hiện diện của các chất hữu cơ như phenol, chloroform có thể ảnh hưởng đến nồng độ và độ tinh sạch của DNA.

Nồng độ DNA ( ng/µl ): 50 x HSPL x OD260 

Trong đó:

HSPL: hệ số pha loãng OD260: chỉ số được đo ở bước sóng 260nm

2.2 Kiểm tra chất lượng DNA bằng phương pháp điện di

Phương pháp ly trích và kiểm tra chất lượng DNA (1)

Phương pháp ly trích và kiểm tra chất lượng DNA (1)

  • Phương pháp điện di có thể kiểm tra chất lượng DNA, sản phẩm PCR và sản phẩm cắt enzyme.
  • Tùy vào sản phẩm cần kiểm tra để sử dụng nồng độ gel agarose. Thời gian và hiệu điện thế trong quá trình điện di cho phù hợp.

Nguyên tắc: 

  • Khi có điện trường chạy xuyên qua gel, DNA mang điện tích âm ở pH trung tính sẽ chạy về hướng anode.
  • Tốc độ di chuyển của các đoạn DNA tỉ lệ thuận với điện thế.

Dung dịch đệm: 

  • Dung dịch đệm điện di ảnh hưởng đến tính di chuyển của DNA trong gel.
  • Trong phòng thí nghiệm các dung dịch đệm điện di thường được sử dụng là TAE, TBE, TPE.

Share this post

FacebookTwitterLinkedInGoogle +Email

Author

ctdtuyet

Chuyên cung cấp thiết bị phòng thí nghiệm

Comment (1)

  • Nguyễn thuỷ tiên Reply

    Những cách trữ DNA sau khi li trích và ưu nhược điểm

    Tháng tám 21, 2021 at 2:03 chiều

Để lại một bình luận Hủy

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *

Bình luận *

Tên *

Email *

Trang web

Δ

Website này sử dụng Akismet để hạn chế spam. Tìm hiểu bình luận của bạn được duyệt như thế nào.

Related Posts

30 Th9

Độ dẫn điện của chất lỏng, ứng dụng và phương pháp xác định

ĐỘ DẪN ĐIỆN CỦA CHẤT LỎNG, ỨNG DỤNG VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH Độ dẫn điện của chất lỏng... read more

23 Th7

Phương pháp so sánh màu sắc của vải, sơn, nhựa, giấy…

PHƯƠNG PHÁP SO SÁNH MÀU SẮC VẢI, SƠN, NHỰA, GIẤY,….. Phương pháp so sánh màu sắc của vải, sơn, nhựa,... read more

15 Th11

Phương pháp xác định độ săn của sợi tách ra từ vải

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘ SĂN CỦA SỢI TÁCH RA TỪ VẢI Phương pháp này chỉ áp dụng cho sợi... read more

02 Th6

Kiểm tra độ ăn mòn kim loại – Phương pháp thử mù muối

KIỂM TRA ĐỘ ĂN MÒN KIM LOẠI (PHƯƠNG PHÁP THỬ MÙ MUỐI) Paint and coating for metal protection – Method... read more

12 Th9

Phương pháp xác định độ bền gấp của giấy (sử dụng máy đo MIT)

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘ BỀN GẤP CỦA GIẤY THEO TCVN Phương pháp xác định độ bền gấp của giấy... read more

03 Th6

Thiết bị thí nghiệm màng bao bì (Plastic flexible packaging testing instruments)

THIẾT BỊ THÍ NGHIỆM MÀNG BAO BÌ CƠ BẢN Các thiết bị thí nghiệm màng bao bì (Plastic flexible packaging... read more

19 Th3

Xác định hàm lượng ion kali ở mô thực vật – Bút đo ion Kali Horiba

XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ION KALI Ở MÔ THỰC VẬT Trong bài viết sau đây sẽ so sánh kết quả... read more

04 Th8

Phương pháp xác định độ bền kéo đứt vải

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘ BỀN KÉO ĐỨT VẢI Phương pháp xác định độ bền kéo đứt vải theo TCVN... read more

12 Th3

Phương pháp kiểm tra nồng độ ion Natri trong thực phẩm

KIỂM TRA NỒNG ĐỘ ION NATRI TRONG THỰC PHẨM Phương pháp kiểm tra nồng độ ion Natri trong thực phẩm... read more

06 Th6

Phương pháp xác định hàm lượng ion Canxi trong sữa và đồ uống

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ION CANXI TRONG SỮA VÀ ĐỒ UỐNG Phương pháp xác định hàm lượng ion... read more

Get in touch

THÔNG TIN LIÊN HỆ

Ms. Tuyết 0978 260 025CÔNG TY CỔ PHẦN CÔNG NGHỆ HIỂN LONGTại HCM: 126 Đường số 2, Khu Dân Cư Tân Phong-Kim Sơn, Phường Tân Phong, Quận 7, Thành phố Hồ Chí Minh,Tại Hà Nội: Tầng thứ 7 Tòa nhà Machino, số 10 đường Trần Phú, Phường Mộ Lao, quận Hà Đông, Hà Nội

THỐNG KÊ TRUY CẬP

  • Online Users: 1
  • Today's Visitors: 22
  • Yesterday's Visitors: 52
FacebookTwitterPinterestLinkedinGoogle +Tumblr labshopvn.com. 2015 Contact Me on Zalo

Từ khóa » Tính Nồng độ Dna