SẮC Ký LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Pptx _ KIỂM NGHIỆM ...

Có thể bạn quan tâm

Tải bản đầy đủ (.pptx) (52 trang)

Trang chủ

Cao đẳng - Đại học

Y - Dược

SẮC ký LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.54 MB, 52 trang )

LOGOKhoa Dược – Bộ môn Kiểm nghiệm thuốcSẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO(HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY –HPLC)Bài giảng pptx các mơn chun ngành dượchay nhất có tại “tài liệu ngành dược haynhất”; />hp?use_id=7046916 Giới thiệu chung Sắc ký lỏng hiệu năng cao - sắc ký lỏng áp suất cao Kỹ thuật phân tích dựa trên cơ sở của sự phân tách các chất trênmột pha tĩnh chứa trong cột, nhờ dòng di chuyển của pha độnglỏng dưới áp suất cao. Sắc ký lỏng dựa trên cơ chế hấp phụ, phânbố, trao đổi ion hay loại cỡ là tuỳ thuộc vào loại pha tĩnh sử dụng. Khi phân tích các chất được hịa tan trong dung mơi thích hợp vàtách ở nhiệt độ thường. Sắc ký thường được hoàn thành trong một thời gian ngắn(khoảng 30 phút). Chỉ những thành phần có hệ số chọn lọc khácnhau mới có thể phân tích được bằng HPLC.2 Giới thiệu chung Ngày nay HPLC đã và đang được sử dụng nhiều tronglĩnh vực phân tích hố học nói chung cũng như trongkiểm tra chất lượng thuốc và phân tích sinh dược họcnói riêng. Trong phân tích thuốc bằng phương pháp sắc ký,phần lớn các dược điển đều sử dụng sắc ký phân bố.3 Giới thiệu chungỨng dụng(1)Định tính(2)Thử tạpchất4(3)Định lượng Giới thiệu chungĐịnh tínhMẫu thửSo sánh thờigianlưucủachất phân tíchtrong dung dịchthửvới thời gianlưucủachấtchuẩntrongdung dịch chuẩnchạy cùng ĐkMẫuchuẩn5 Giới thiệu chungĐịnh lượngPhươngphápchuẩnngoạiPhươngphápthêmchuẩnPhươngphápchuẩnnội6Phươngphápchuẩnhóadiệntích. Nội dung1• Thơng số đặc trưng2• Hệ thống máy HPLC3• Các kỹ thuật HPLC4• Hướng dẫn chọn kỹ thuật HPLC5• Chuẩn hóa cột sắc ký lỏng hiệu năng cao6• Định lượng bằng phương pháp HPLC7• Các phương pháp định lượng HPLC7 1. Thông số đặc trưngHệ số dung lượng k’Hệ số chọn lọc αHệ số đối xứng FSố đĩa lý thuyết và hiệu lực cột NĐộ phân giải Rs8 1. Thông số đặc trưngTối ưu: 1 < k’ < 8Hệ số dung lượng k’K : hệ số phân bốVs : thể tích pha tĩnhVm: thể tích pha độngQs: lượng chất trong pha tĩnhQm: lượng chất trong phađộngtR : thời gian lưut’R : thời gian lưu hiệu chỉnht0: thời gian chết9 1. Thông số đặc trưngHệ số chọn lọc α1,05 ≤ α ≤ 2,0Hệ số đối xứng FW: Chiều rộng pic đo ở 1/20 chiều cao pica: Khoảng cách từ đường vng góc hạ từ đỉnh pic đến mép đường congphía trước tại vị trí 1/20 chiều cao pic.10 1. Thông số đặc trưngSố đĩa lý thuyết và hiệu lực cột NW: Chiều rộng đo ở đáy picW1/2: Chiều rộng pic đo ở nửa chiều cao picRs >1. Tối ưu Rs = 1,5Độ phân giải RstRB, tRA: Thời gian lưu của 2 pic liền kề nhau (B và A),WB , WA: Độ rộng pic đo ở các đáy pic,W1/2B, W1/2A: Độ rộng pic đo ở nửa chiều cao pic.Các giá trị: tRB, tRA, WB, WA , W1/2B , W1/2A phải tính theo cùng một đơn vị.11 Bài 1: Dữ kiện sau thu được bằng sắc ký trên cột dài 40cm.Hãy tính :a/ Số đĩa lý thuyết trung bình của cột ?b/ Chiều cao của đĩa ? H = L/Nc/ Độ phân giải cho:+ B và A+ B và C+ A và C12 Bài 2. Khi chạy sắc ký một hỗn hợp 2 chất A và B thu được thời gian lưu lầnlượt là: 10,0 và 10,9 trên cột dài 40cm. Một chất khơng lưu giữ qua cột ở 1,9phút.Cho biết thể tích pha tĩnh VS = 19,6ml và thể tích pha động VM = 62,6ml.Hãy tính :a/. Hệ số dung lượng k’ cho mỗi chất ?b/. Hệ số phân bố cho mỗi chất ?c/. Hệ số chọn lọc cho A và B ?13 2. Hệ thống máy HPLC1. Bình chứa dungmơi pha động2. Bộ phận đuổi khí3. Bơm cao áp4. Bộ phận tiêm mẫu5. Cột sắc ký6. Detector7. Máy tính –phần mềm8. Máy in14 2. Hệ thống máy HPLC15 3. Các kỹ thuật HPLCPhân bố12Hấp phụPhân loạiRây phân tử3416Trao đổi ion 3. Các kỹ thuật HPLCSắc ký phân bố hiệu năng caoPha tĩnhSắc kýký lỏnglỏng- lỏnglỏng (LLC):(LLC): lớplớpSắcSắc kýký phapha liênliên kếtkết (BPC):(BPC):Sắcmỏng phapha lỏnglỏng hữuhữu cơcơ baobaomỏngđược liênliên kếtkết hóahóa họchọc vớivớiđượctrên bềbề mặtmặt củacủa cáccác tiểutiểu phânphântrênchất mang.mang. CácCác nhómnhóm chứcchứcchấtchấtmangmangchấthữu cơcơ liênliên kếtkết vớivới bềbề mặtmặthữuNhược điểm:điểm: bịbị rửarửa trơitrơi dầndầnNhượccủa cáccác tiểutiểu phânphân silicasilica quaquacủatheo dịngdịng phapha độngđộng  hiệuhiệutheocácnhómnhómsilanolsilanolcáclực cộtcột bịbị giảmgiảm dầndần trongtrong qqlựctrìnhsửsửdụng.dụng.trình17 3. Các kỹ thuật HPLCSắc ký phân bố hiệu năng caoPha tĩnhMột số pha liên kết thường dùng18 3. Các kỹ thuật HPLCPha tĩnh- Khi sử dụng silica, nhơm oxyd hoặc polyme xốp thìcác chất được phân tách theo cơ chế hấp phụ nênđược gọi là sắc ký hấp phụ.- Nếu pha tĩnh là nhựa trao đổi ion thì gọi là sắc kýtrao đổi ion.- Nếu pha tĩnh là polyme xốp như dextran..., ta cósắc ký rây phân tử.19 3. Các kỹ thuật HPLCSắc ký phân bố hiệu năng caoTuỳ thuộc vào việc sử dụng pha động và pha tĩnhngười ta chia sắc ký phân bố thành 2 loại (sắc ký phathuận và sắc ký pha đảo)20 3. Các kỹ thuật HPLCPha độngPha động có thể là dung môi đơn hay hỗn hợpcủa 2, 3 hay 4 thành phần. Người ta có thể thay đổiđộ phân cực của pha động bằng cách thay đổi tỷ lệcủa các thành phần dung môi trong hỗn hợp.Kỹ thuật thay đổi liên tục thành phần dung môitrong thời gian chạy sắc ký được gọi là rửa giảigradient hoặc chương trình hóa dung môi.21 3. Các kỹ thuật HPLCSắc ký phân bố hiệu năng caoSắc ký pha thuậnPha tĩnh phân cực hơnpha động.Phađộng:khôngphân cực (hỗn hợppentan,hexan,heptan, isootan)Các chất không phâncực sẽ được rửa giảisớm.Thứ tự rửa giải sẽchậm dần theo chiềutăng của độ phân cực22 3. Các kỹ thuật HPLCSắc ký phân bố hiệu năng caoPhổ biến nhấtSắc ký pha đảoPha động phân cựchơn pha tĩnh.Pha tĩnh: không phâncực (C18, C8, C6H5).Pha động: phân cực(H20,MeOH,acetonitril).Thứ tự rửa giải: chấtphân cực ra trước,các chất ít và khôngphân cực ra sau.23 3. Các kỹ thuật HPLCMột số chú ýSắc ký phân bố hiệu năng caoSắc ký pha đảo Để điều chỉnh độ phân cực của pha động cóthể hịa lẫn thêm những dung môi nhưmethanol, ethanol (EtOH), acetonitril, dioxan,tetrahydrofuran (THF) và dimethylformamid. Một số thành phần khác cũng có thể đượcthêm vào pha động như: các acid, base, đệm ,chất diện hoạt.24 3. Các kỹ thuật HPLCMột số chú ýSắc ký phân bố hiệu năng caoSắc ký pha đảo Khi pha động có thêm cácmuối vơ cơ hoặc các chấthoạt động bề mặt, nên lọc nótrước khi dùng vì có thể cócặn khơng tan trong nướcgây bẩn cột. Việc đuổi khí rất quan trọngvới pha động pha đảo25

Tài liệu liên quan

CÔNG tác KIỂM NGHIỆM THUỐC pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 56
- 60
- 2
CÔNG tác KTCL THUỐC và hệ THỐNG KTCLT pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 47
- 36
- 2
CÔNG tác TIÊU CHUẨN pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 32
- 66
- 3
ĐẠI CƯƠNG môn KIỂM NGHIỆM pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 47
- 76
- 2
KIỂM NGHIỆM THUỐC bột THUỐC cốm pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 56
- 206
- 7
KIỂM NGHIỆM THUỐC DẠNG LỎNG pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 68
- 88
- 2
KIỂM NGHIỆM THUỐC ĐÔNG dược pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 37
- 71
- 3
KIỂM NGHIỆM THUỐC mỡ pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 25
- 63
- 5
KIỂM NGHIỆM VIÊN nén VIÊN NANG pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 39
- 68
- 3
XÁC ĐINH GIỚI hạn các tạp CHẤT TRONG THUỐC và dược LIỆU pptx _ KIỂM NGHIỆM (slide nhìn biến dạng, tải về đẹp lung linh)
- 33
- 169
- 6