Tách chiết, tinh sạch và cố định enzyme bromelain từ dứa
Trich dan Tách chiết, tinh sạch và cố định enzyme bromelain từ dứa - pdf 15 Download miễn phí Đồ án Tách chiết, tinh sạch và cố định enzyme bromelain từ dứa MỤC LỤCTRANGCHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 11.1. ĐẶT VẤN ĐỀ 11.2. MỤC TIÊU ĐỀ TÀI 21.2.1. Mục tiêu tổng quát 21.2.1. Mục tiêu cụ thể 21.3. MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU 21.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3 1.4.1. Nghiên cứu lý thuyết 3 1.4.2. Nghiên cứu thực nghiệm 31.5. GIỚI HẠN CỦA ĐỀ TÀI 3CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 42.1. SƠ LƯỢC VỀ CÂY DỨA 42.1.1. Lịch sử và sự phát triển của cây dứa 42.1.2. Thành phần dinh dưỡng trong dứa 52.1.3. Các bộ phận trên cây dứa có thể cho enzyme bromelain 6 2.1.3.1. Quả 6 2.1.3.2. Thân 6 2.1.3.3. Lá 6 2.1.3.4. Rễ 62.2. GIỚI THIỆU SƠ LƯỢC VỀ ENZYME 72.3. ENZYME PROTEASE 82.3.1. Giới thiệu sơ lược các enzyme protease 8 2.3.1.1. Protease vi sinh vật 8 2.3.1.2. Protease động vật 9 2.3.1.3. Protease thực vật 102.3.2. Ứng dụng của enzyme protease 102.4. ENZYME BROMELAIN THU NHẬN TỪ DỨA 112.4.1. Giới thiệu enzyme bromelain 112.4.2. Tính chất vật lý của enzyme bromelain 112.4.3. Tính chất hoá học của enzyme bromelain 12 2.4.3.1. Cấu tạo hoá học 12 2.4.3.2. Cấu trúc không gian của bromelain 132.4.4. Hoạt tính của enzyme bromelain 13 2.4.4.1. Cơ chế tác động 14 2.4.4.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme bromelain 142.4.5. Ứng dụng của enzyme bromelain 16 2.4.5.1. Trong công nghiệp thực phẩm 16 2.4.5.2. Trong y dược học 17 2.4.5.3. Một số enzyme bromelain thương mại 172.4.6. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về enzyme bromelain 18 2.4.6.1. Nghiên cứu trong nước 18 2.4.6.2. Nghiên cứu ngoài nước 182.5. KĨ THUẬT CƠ BẢN CHUẨN BỊ DỊCH PROTEIN THÔ 192.6. CÁC PHƯƠNG PHÁP TỦA PROTEIN 192.6.1. Tủa bằng muối sulfate ở các nồng độ khác nhau 192.6.2. Tủa bằng dung môi hữu cơ 202.6.3. Tủa bằng điểm đẳng nhiệt 202.6.4. Tủa bằng các loại polymer 202.6.5. Tủa bằng các chất đa điện phân 212.7. SỰ CỐ ĐỊNH ENZYME 21 2.7.1. Định nghĩa enzyme cố định 21 2.7.2. Tính chất ưu và nhược của enzyme cố định 21 2.7.2.1. Ưu điểm 21 2.7.2.2. Nhược điểm 222.7.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme cố định 222.7.4. Các phương pháp cố định enzyme 23 2.7.4.1. Phương pháp liên kết enzyme với vật liệu cố định 23 2.7.4.2. Phương pháp hấp thụ vật lí 24 2.7.4.3. Phương pháp nhốt 24 2.7.4.4. Phương pháp khâu mạch 252.7.5. Đặc điểm, tính chất của Natrialginate 252.7.6. Ứng dụng của enzyme cố định 26 2.7.6.1. Trong công nghiệp 26 2.7.6.2. Trong y học 26 2.7.6.3. Trong nghiên cứu khoa học 27 2.7.6.4. Trong bảo vệ môi trường 272.7.7. Tình hình nghiên cứu trong nước và ngoài nước 27 2.7.7.1. Tình hình nghiên cứu trong nước 27 2.7.7.2. Tình hình nghiên cứu nước ngoài 28CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 293.1. VẬT LIỆU 293.1.1. Chế phẩm enzyme thô 293.1.2. Hóa chất 303.1.3. Thiết bị 303.2. PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 313.2.1. Chiết thô enzyme từ chế phẩm dứa 313.2.2. Phương pháp xác định hàm lượng protein và hoạt tính bromelain từ dịch chiết enzyme thô 32 3.2.2.1. Xác định hàm lượng protein bằng phương pháp Bradford 33 3.2.2.2. Xác định hoạt tính enzyme theo phương pháp Amano 353.2.3. Tách enzyme bằng các phương pháp tủa bằng cồn 960, muối Ammonium sulfate (NH4)2SO4 và aceton(CH3COCH3) 39 3.2.3.1. Nguyên tắc 39 3.2.3.2. Phương pháp thí nghiệm tủa enzyme bằng cồn 960 39 3.2.3.3. Phương pháp thí nghiệm tủa bằng muối Ammonium sulfate 40 3.2.3.4. Phương pháp thí nghiệm tủa bằng aceton 413.2.4. Phương pháp xác định tỉ lệ cồn 960, nồng độ muối (NH4¬)2SO4 và tỉ lệ aceton tối ưu để tủa enzyme bromelain 423.2.5. Phương pháp xác định pH, nhiệt độ tối ưu và độ bền nhiệt cho hoạt động của enzyme bromelain. 42 3.2.5.1. Xác định pH tối ưu cho hoạt động của bromelain 42 3.2.5.2. Xác định nhiệt độ tối ưu cho hoạt động của bromelain 42 3.2.5.3. Khảo sát độ bền nhiệt 433.2.6. Cố định enzyme bromelain trên cơ chất Natrialginate bằng phương pháp nhốt 43 3.2.6.1. Tạo dung dịch Natrialginate 3% 43 3.2.6.2. Tiến hành cố định 43 3.2.6.3. Phương pháp xác định hiệu suất cố định protein và hiệu suất cố định hoạt tính của enzyme cố định 433.2.7. Phương pháp khảo sát ảnh hưởng của các yếu tố lý hoá đến hoạt tính của enzyme bromelain được cố định trên Natrialginate. 44 3.2.7.1. Khảo sát ảnh hưởng của pH 44 3.2.7.2. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ 45 3.2.7.3. Khảo sát độ bền nhiệt 453.2.8. Khảo sát số lần tái sử dụng bromelain cố định trên Natrialginate 453.2.9. Bước đầu tinh sạch enzyme bromelain chồi dứa bằng sắc ký lọc gel 46 3.2.9.1. Nguyên tắc 46 3.2.9.2. Thiết bị và hóa chất 46 3.2.9.3. Các bước tiến hành 473.2.9.4. Tính hiệu suất về hoạt tính enzyme protease và độ tinh sạch của enzyme sau tinh sạch bằng sắc ký lọc gel 493.2.10. Xác định trọng lượng phân tử enzyme bromelain bằng phương pháp điện di SDS - PAGE 49 3.2.10.1. Nguyên tắc 50 3.2.10.2. Thiết bị và hóa chất 50 3.2.10.3. Phương pháp 52 3.2.10.4. Xác định trọng lượng phân tử của protein 54CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 554.1. HÀM LƯỢNG PROTEIN VÀ HOẠT TÍNH ENZYME BROMELAIN DỊCH CHIẾT THÔ CÁC BỘ PHẬN TRÊN QUẢ DỨA. 554.2. KHẢO SÁT TÁC NHÂN TỦA ENZYME BROMELAIN LÀ CỒN 960 564.2.1. Hàm lượng protein và hoạt tính bromelain bộ phận chồi trong dịch tủa là cồn 960 564.2.2. Xác định pH, nhiệt độ tối ưu và độ bền nhiệt cho hoạt tính bromelain bộ phận chồi trong dịch tủa cồn với tỉ lệ 1 dứa : 4 cồn 58 4.2.2.1. pH tối ưu 58 4.2.2.2. Nhiệt độ tối ưu 59 4.2.2.3. Khảo sát độ bền nhiệt 604.3. KHẢO SÁT TÁC NHÂN TỦA ENZYME BROMELAIN LÀ MUỐI AMMONIUM SULFATE 614.3.1. Hàm lượng protein và hoạt tính bromelain bộ phận chồi trong dịch tủa là muối Ammonium sulfate ((NH4¬)2SO4) 614.3.2. Xác định pH, nhiệt độ tối ưu và độ bền nhiệt cho hoạt tính bromelain bộ phận chồi trong dịch tủa muối với nồng độ 60% 62 4.3.2.1. pH tối ưu 62 4.3.2.2. Nhiệt độ tối ưu 63 4.3.2.3. Khảo sát độ bền nhiệt 644.4. KHẢO SÁT TÁC NHÂN TỦA ENZYME BROMELAIN LÀ ACETON (CH3COCH3) 664.4.1. Hàm lượng protein và hoạt tính bromelain bộ phận chồi trong dịch tủa là aceton (CH3COCH3) 664.4.2. Xác định pH, nhiệt độ tối ưu và độ bền nhiệt cho hoạt tính bromelain bộ phận chồi trong dịch tủa aceton với tỉ lệ 1 dứa : 5 aceton 67 4.4.2.1. pH tối ưu 67 4.4.2.2. Nhiệt độ tối ưu 68 4.4.2.3. Khảo sát độ bền nhiệt 694.5. SO SÁNH VIỆC TỦA ENZYME BROMELAIN TRONG CỒN 960, MUỐI AMMONIUM SULFATE VÀ ACETON 704.6. CỐ ĐỊNH ENZYME BROMELAIN TRÊN NATRIALGINATE 714.6.1. Kết quả quá trình cố định enzyme bromelain trên chất mang Natrialginate 714.6.2. Hiệu suất cố định protein và hiệu suất cố định hoạt tính của enzyme bromelain trên gel Natrialginate 714.6.3. So sánh hàm lượng và hoạt tính enzyme bromelain cố định với hàm lượng và hoạt tính enzyme trước khi cố định 724.6.4. Khảo sát hoạt tính của enzyme cố định trên Natrialginate theo pH, nhiệt độ và độ bền nhiệt 72 4.6.4.1. Khảo sát hoạt tính của enzyme cố định theo pH 72 4.6.4.2. Khảo sát hoạt tính của enzyme cố định theo nhiệt độ 74 4.6.4.3. Khảo sát hoạt tính của enzyme cố định theo độ bền nhiệt 754.6.5. Khảo sát số lần tái sử dụng bromelain cố định trên Natrialginate 764.6.6. So sánh độ bền nhiệt của chế phẩm enzyme ban đầu trước khi cố định và enzyme cố định trên Natrialginate 784.7. TINH SẠCH ENZYME BROMELAIN TRÊN BIOGEL P-100 794.7.1. Hàm lượng protein và hoạt tính bromelain trước khi tinh sạch 794.7.2. Tinh sạch enzyme bằng sắc ký lọc gel với các thông số 794.7.3. Tinh sạch enzyme đã tủa với cồn 960 794.7.4. Tinh sạch enzyme đã tủa với muối Ammonium sulfate 804.7.5. Tinh sạch enzyme đã tủa với aceton 824.7.6. So sánh kết quả giữa chế phẩm enzyme thô và dịch enzyme sau khi đã qua quá trình sắc ký lọc gel 834.8. KẾT QUẢ PHÂN TÁCH HỆ ENZYME BROMELAIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI SDS - PAGE 844.8.1. Thành phần mẫu điện di 844.8.2. Kết quả điện di 84CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 875.1. KẾT LUẬN 875.2. KIẾN NGHỊ 89TÀI LIỆU THAM KHẢO IPHỤ LỤC III http://s1.liketly.com/flash/edoc/jh2i1fkjb33wa7b577g9lou48iyvfkz6-swf-2013-12-27-do_an_tach_chiet_tinh_sach_va_co_dinh_enzyme_brom.CBALfpWlrE.swf /tai-lieu/de-tai-ung-dung-tren-liketly-52364/Để tải bản Đầy Đủ của tài liệu, xin Trả lời bài viết này, Mods sẽ gửi Link download cho bạn sớm nhất qua hòm tin nhắn.Ai cần download tài liệu gì mà không tìm thấy ở đây, thì đăng yêu cầu down tại đây nhé:Nhận download tài liệu miễn phí
Tóm tắt nội dung tài liệu:
CHƯƠNG 1 MỞ ĐẦU ĐẶT VẤN ĐỀ Trong những năm gần đây người ta dành sự quan tâm rất nhiều đến việc tách chiết enzyme bromelain để sử dụng làm tác nhân kích thích tiêu hóa, chữa vết thương, ổn định dịch lên men. Việc nghiên cứu thành công một enzyme là ở việc chiết xuất, xác định đặt tính, yếu tố ảnh hưởng hoạt động của enzyme. Việc tinh chế enzyme hết sức cần thiết bởi làm cho enzyme tinh sạch ít còn lẫn tạp chất (các protein không phải enzyme), nâng cao hoạt tính enzyme so với dạng thô nhiều lần, thuận lợi cho nghiên cứu, bảo quản, nguyên liệu cho một số ngành công nghệ thực phẩm và trong dược phẩm dùng làm thuốc trong điều trị và sản xuất. Bên cạnh đó việc nâng cao hiệu suất sử dụng enzyme bromelain cũng đang được nghiên cứu. Phương pháp cố định enzyme là một trong những hướng nghiên cứu nhằm nâng cao hiệu suất sử dụng enzyme. Bằng cách cố định enzyme trong chất mang không tan trong nước enzyme có thể tách ra khỏi cơ chất dễ dàng sau phản ứng. Thêm vào đó enzyme cố định được tái sử dụng nhiều lần khắc phục tình trạng khan hiếm enzyme như hiện nay. Ngày nay, enzyme đã được sản xuất và sử dụng trong nhiều lĩnh vực như công nghệ thực phẩm, y học, dược phẩm và các ngành công nghiệp khác. Đối với nước ta nguồn enzyme từ thực vật có triển vọng lớn vì nguồn nguyên liệu rất phong phú (dứa, đu đủ,...). Trong quá trình chế biến dứa đóng hộp chỉ khoảng 30% quả dứa được sử dụng, còn lại 70% phụ phẩm mà chủ yếu là chồi trên quả dứa, thân dứa (Hội thảo quốc gia năm 2005). Nếu tận dụng được nguồn phế phẩm thì vừa có thể giảm thiểu chất thải hữu cơ gây ô nhiễm môi trường vừa có thể sản xuất sản phẩm bromelain bởi vì hầu như trên tất cả các bộ phận của cây dứa đều có enzyme. Bromelain có ba hoạt tính khác nhau: peptidase, amidase, esterase. Bromelain thân, chồi có thể phân hủy cả cơ chất tự nhiên lẫn cơ chất tổng hợp, chúng là enzyme có giá trị kinh tế và hầu hết sản phẩm bromelain thương mại được ly trích từ thân dứa. Trong đề tài này chúng tui đã tiến hành tách chiết, tinh sạch enzyme bromelain ở quy mô nhỏ. Khảo sát các tác nhân tủa, xác định pH, nhiệt độ tối ưu và độ bền nhiệt cho hoạt động của enzyme trên chồi dứa. Cố định enzyme bromelain trên Natrialginate bằng phương pháp tủa muối Ammonium sulfate. MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Mục tiêu tổng quát Tách chiết và tinh sạch enzyme bromelain từ chồi dứa. Cố định enzyme bromelain trên Natrialginate. Mục tiêu cụ thể Thu nhận dịch enzyme bromelain từ các bộ phận quả dứa: chồi dứa, mắt dứa, thân dứa, cùi dứa. Xác định tỉ lệ cồn 96o, nồng độ muối Ammonium sulfate và tỉ lệ aceton tối ưu để tủa enzyme bromelain. Xác định pH, nhiệt độ tối ưu và độ bền nhiệt cho sự hoạt động của enzyme bromelain. So sánh các tác nhân tủa của bộ phần chồi dứa sau khi tủa. Cố định enzyme bromelain trên Natrialginate. So sánh hàm lượng và hoạt tính enzyme bromelain cố định với hàm lượng và hoạt tính enzyme trước khi cố định. Tinh sạch enzyme bromelain. Xác định trọng lượng phân tử enzyme bromelain bằng phương pháp điện di. MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU Làm cơ sở nghiên cứu để sản xuất enzyme bromelain từ lượng phế phẩm lớn là chồi dứa. Đồng thời cố định enzyme bromelain trên cơ chất Natrialginate để mang lại hiệu quả kinh tế trong công nghiệp. 1.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.4.1. Nghiên cứu lý thuyết Thu thập tài liệu trong và ngoài nước có liên quan đến nội dung nghiên cứu. Tổng hợp phân tích, so sánh và đánh giá lựa chọn hướng nghiên cứu phù hợp. Phân tích đánh giá điều kiện thực tế về kỹ thuật, kinh tế, xã hội để xác định giới hạn nghiên cứu và phương án thực nghiệm. 1.4.2. Nghiên cứu thực nghiệm Lập kế hoạch thực hiện thí nghiệm. Xử lý kết quả bằng Excel và phần mềm Statgraphics. GIỚI HẠN ĐỀ TÀI Vì lý do giới hạn về thời gian và kinh tế, đề tài chỉ thực hiện tủa enzyme với ba tác nhân tủa (muối, cồn và aceton), tinh sạch enzyme bromelain trên Biogel P-100, điện di bằng phương pháp SDS-PAGE và chỉ thực hiện cố định enzyme trên cơ chất Natrialginate ở quy mô phòng thí nghiệm. ... Yêu cầu Download Tài liệu, ebook tham khảo khác
Kế toán bán hàng và xác định kết quả bán hàng tại Công ty Cổ phần Dược Vật tư Y tế Quảng Nam
Nghiên cứu khả năng xử lý nước thải nhiễm dầu của thực vật nổi: lục bình, bèo
Nghiên cứu khả năng tăng trưởng của một số vi sinh vật trên bề mặt giá đỡ cellulose vi khuẩn (BC – bacterial cellulose)
Nghiên cứu hiệu quả xử lý nước thải sinh hoạt bằng phương pháp lọc hiếu khí sử dụng xơ dừa làm giá thể kết hợp hồ thủy sinh
Công nghệ VDSL và khả năng ứng dụng
Nghiên cứu tuyển chọn một số chủng vi sinh vật có khả năng phân hủy tinh bột và ứng dụng trong xử lý nước thải sản xuất nui
Tình hình môi giới chứng khoán tại ACBS – Chi nhánh Sài Gòn
Tiểu luận: HYDRO VÀ NĂNG LƯỢNG HYDRO TRONG TƯƠNG LAI
Tiểu luận: TÍNH BAZƠ CỦA HỢP CHẤT HỮU CƠ
Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng đường và NaCl trong quá trình lên men vang vải thiều
Hệ thống tự động tổng hợp link tải tài liệu, ebook miễn phí cho các bạn sinh viên tham khảo.
