Các Phương Pháp định Lượng Vi Sinh Vật - Tài Liệu Text - 123doc

1. Trang chủ >
2. Giáo án - Bài giảng >
3. Cao đẳng - Đại học >

Các phương pháp định lượng vi sinh vật

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (380.59 KB, 47 trang )

4.1. Phương pháp đếm trực tiếpĐếm bằng buồng đếm trên kính hiển vi. Thường áp dụng để xácđịnh mật độ vi sinh vật đơn bào có kích thước lớn như nấm men,tảo…- Ưu điểm: Quy trình này cho phép xác định nhanh chóng mật độvi sinh vật chứa trong mẫu.- Nhược điểm:Không phân biệt được tế bào sống và tế bào chếtDễ nhầm lẫn tế bào vi sinh vật với các vật thể khác trong mẫuKhó đạt được độ chính xác caoKhông thích hợp với huyền phù vi sinh vật có mật độ thấp.- Các phương pháp đếm trực tiếp sau:Đếm bằng buồng đếm hồng cầuĐếm bằng buồng đếm BreedĐếm bằng kính hiển vi huỳnh quang4.2. Phương pháp đếm khuẩn lạcPhương pháp này cho phép xác định mật độ tế bào cònsống hiện diện trong mẫu.Tế bào còn sống là tế bào có khả năng phân chia tạothành khuẩn lạc trên môi trường chọn lọc.Phương pháp này cho phép định lượng chọn lọc vi sinhvật tùy môi trường và điều kiện nuôi cấy.Trong phương pháp này cần thực hiện pha loãng mẫuthành nhiều độ pha loãng bậc 10 liên tiếp nhau.Số lượng khuẩn lạc tối ưu là trong khoảng từ 25 – 250khuẩn lạc/đĩa.Quy trình thao tác như sau:- Pha loãng mẫu theo dãy thập phân- Tạo hộp trải hay hộp đổ- Ủ ở điều kiện nhiệt độ và thời gian thích hợp- Đếm khuẩn lạc và tính kết quả. Mật độ tế bào vi sinh vật trongmẫu ban đầu được tính theo công thức sau:NA (CFU/g hay CFU/ml) =Trong đó:n1Vf1 + …+ niVfiA: số tế bào vi khuẩn trong 1g hay 1ml mẫuN: tổng số khuẩn lạc đếm được trên các đĩa đã chọnni: số lượng đĩa cấy tại độ pha loãng thứ iV: thể tích dịch mẫu (ml) cấy vào trong mỗi đĩafi: độ pha loãng tương ứngVí dụ: phân tích 1g mẫu được kết quả như sauPha loãng mẫu lỏngChuẩn bị và pha loãng mẫu rắn4.3. Phương pháp MPN (phương pháp tối khả)Là phương pháp đánh giá số lượng vi sinh vật theo sốlượng vi sinh vật có xác suất lớn nhất hiện diện trong 1đơn vị thể tích mẫu. Phương pháp này có thể dùng đểđịnh lượng mọi nhóm vi sinh vật có thể được nuôi cấytrong môi trường lỏng chọn lọc và cho kết quả biểu kiếnthích hợp.Là phương pháp định lượng dựa trên kết quả định tínhcủa một loạt thí nghiệm được lặp lại ở một số độ phaloãng khác nhau (Thông thường, là lặp lại 3 lần ở 3 độpha loãng bậc 10 liên tiếp, tổng cộng: 3x3=9 ốngnghiệm). Số lượng ống nghiệm lặp lại càng cao thì độchính xác của phương pháp này càng lớn.Quy trình thực hiện phương pháp này như sau:- Cho vào các ống nghiệm có chứa môi trường thích hợpcho sự tăng trưởng của đối tượng vi sinh vật cần địnhlượng một thể tích xác định dung dịch mẫu ở 3 nồng độpha loãng liên tiếp.- Ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp.- Dựa vào kết quả biểu kiến chứng minh sự tăng trưởngcủa vi sinh vật cần kiểm định trong từng ống nghiệm(phản ứng dương tính), ghi nhận số lượng ở từng độ phaloãng.- Sử dụng số liệu này dựa vào bảng Mac Crady suy ramật độ vi sinh vật được trình bày dưới dạng sốMPN/100ml hay số MPN/1g mẫu.Bảng Mac CradyCác thử nghiệm sinh hóaNgười ta có thể định danh vi sinh vật dựa vào các đặcđiểm sinh hóa đặc trưng của loài (hay nhóm) vi sinh vậtđó.Có ba cách tiếp cận để thực hiện các thử nghiệm sinhhóa dùng cho mục đích định danh là:- Cách truyền thống.- Cách sử dụng các bộ KIT.- Dùng các thiết bị tự động.Thử nghiệm khả năng lên men:Nhằm xác định khả năng sử dụng một nguồn cacbonnhất định bởi vi sinh vật để tăng trưởng.Nguồn cacbon này được chia làm 3 nhóm: đường đơn,đường đa và rượu.Khả năng lên men được đánh giá sự làm giảm pH củamôi trường dẫn đến sự thay đổi màu của chỉ thị pH trongmôi trường.Ngoài ra, CO2 được tạo thành sẽ được bẫy lại thành bọtkhí trong ống chuông Durham làm nổi ống chuông này(môi trường lỏng) hoặc làm vỡ thạch (môi trường rắn).Được dùng để định danh các vi sinh vật đường ruột.

Xem Thêm

Tài liệu liên quan

• Bài giảng kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm chuyên ngành công nghệ sinh học
  • 47
  • 1,985
  • 11
• Quyết định số 30/2008/QĐ-BGTVT
  • 1
  • 0
  • 0
• Quyết định số 3881/QĐ-BGTVT
  • 2
  • 0
  • 0

Tải bản đầy đủ (.ppt) (47 trang)

Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về

(1.1 MB) - Bài giảng kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm chuyên ngành công nghệ sinh học-47 (trang) Tải bản đầy đủ ngay ×